基于多肽的核酸递送是一种最新的递送技术，能够显著提升各类细胞，包括原代细胞、难转细胞系的核酸转染 [1][2]。GentleFectTM 技术基于高通量多肽筛选平台，精准识别具有相分离潜力的内源多肽序列，开发了针对难转细胞系的 Gentle A30 全能难转细胞核酸转染试剂。多肽通过液 - 液相分离自组装形成纳米级微滴，借助细胞膜胞饮作用实现高效内化，在维持细胞活性前提下显著提升各类物种难转细胞的核酸递送效率。
同时适用于各类核酸分子转染，包括 DNA, mRNA, siRNA, circRNA, Crispr 等；
预混合转染液和转染缓冲液，仅需往试剂中加入核酸，即可完成转染配置。
货号 名称 包装
1000001 全能难转细胞核酸转染试剂 0.3 ml
短期 4℃保存，长期保存于 - 20℃。
待转染的贴壁细胞 (细胞汇合率达到 70-80%) 或悬浮细胞，确保细胞活率 > 90%，无菌无酶 EP 管。将完全培养基、Opti-MEM 培养液、胰酶、核酸转染试剂恢复至室温，核酸保持低温。如果核酸为粉末状态，请提前用无核酶水溶解，此过程在超净台操作。
常见问题及解答
贴壁细胞和悬浮细胞操作有什么区别
悬浮细胞为悬浮培养，故相对于贴壁细胞每孔可以培养更多的细胞，可以根据细胞情况进行调整。此外，这两类细胞都可在细胞传代时进行转染操作，贴壁细胞无需提前铺板，大大简化实验步骤；经大量实验发现，制备的细胞悬液在 EP 管中与转染混合液孵育可使转染效率最大化。
转染试剂用量怎么确定？
建议按照表 1、表 2 推荐的转染试剂用量进行转染或根据细胞量来等比增加 / 减少转染试剂的用量，其中悬浮细胞可以根据客户细胞培养时的常用密度进行转染。
如何提高转染效率？
① 转染前应确保细胞处于良好的生长状态，建议细胞活率大于 90%；
② 适当增加转染试剂和核酸的用量。
③ 适当延长转染时间，孵育时间长短影响阳性率和细胞活率，根据细胞特性可尝试更短或更长孵育时间。一般建议在 1 小时到 2 小时之间。
哪些实验操作会影响转染效率？
① 细胞转染孵育时请勿使用含 FBS 的培养基，FBS 会严重影响细胞转染效果；
② Gentle A30 转染试剂不建议剧烈涡旋，推荐使用移液器温和反复吹打混匀。
内置阳性对照品怎么使用？
设置阳性对照时，GFP mRNA 根据上述表格中的 mRNA 使用量进行实验即可。
实验中离心可能出现的问题
① 本文中出现的离心程序设置均为室温，300g,5 分钟；
② 在转染结束时，EP 管离心后没有看到细胞沉淀是正常现象，这是细胞量较少导致的；
③ 在转染结束后，可加入 1 mL 完全培养基轻吹混匀，终止转染的同时可去除转染试剂对细胞离心的影响。(转染试剂轻微粘稠是属于正常现象)
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