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Cat. Number
1010001
Chemical Name
1010001 金简达GentleAP30 全能原代细胞核酸转染试剂
Qty 1
3.6ml
References

产品概述

基于多肽的核酸递送技术可提升各类细胞的核酸转染效率,GentleFectTM 技术通过高通量多肽筛选,开发出针对常见原代细胞的 Gentle AP30 转染试剂。该试剂借助多肽的液 - 液相分离自组装形成纳米级微滴,经细胞膜胞饮作用高效内化,在维持细胞活性的同时,提高各类物种原代细胞的核酸递送效率 

产品特性

  • 适用于多种核酸分子转染,包括 DNA、mRNA、siRNA、circRNA、Crispr 等。

  • 预混合转染液和转染缓冲液,只需加入核酸,即可一步完成转染配置。

产品规格

1010001 Gentle AP30 全能原代细胞核酸转染试剂 3.6 ml

保存条件

短期可在 4℃保存,长期需保存于 - 20℃。

产品组分

  • Gentle AP30 全能原代细胞核酸转染试剂

  • 已验证的阳性对照(GFP mRNA)

实验前准备

待转染的贴壁细胞(细胞汇合率达到 70-80%)或悬浮细胞,确保细胞活率 > 90%,准备无菌无酶 EP 管。将完全培养基、Opti-MEM 培养液、胰酶、核酸转染试剂恢复至室温,核酸保持低温。若核酸为粉末状态,需提前用无核酶水溶解,操作在超净台进行。


实验步骤图解

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转染体系

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  1. 常见问题及解答

  2. 贴壁细胞和悬浮细胞操作有什么区别?

    • 悬浮细胞为悬浮培养,相对于贴壁细胞每孔可培养更多细胞,可根据细胞情况调整。

    • 两类细胞都可在细胞传代时进行转染操作,贴壁细胞无需提前铺板,简化实验步骤;细胞悬液在 EP 管中与转染混合液孵育可使转染效率最大化。

  3. 转染试剂用量怎么确定?

    • 建议按照表 1、表 2 推荐的转染试剂用量进行转染,或根据细胞量等比增加 / 减少转染试剂的用量,悬浮细胞可根据常用密度转染。

  4. 如何提高转染效率?

    • 转染前确保细胞处于良好生长状态,细胞活率大于 90%;

    • 适当增加转染试剂和核酸的用量;

    • 适当延长转染时间,孵育时间影响阳性率和细胞活率,一般建议在 0.5 小时到 1 小时之间,可根据细胞特性尝试更短或更长时间。

  5. 哪些实验操作会影响转染效率?

    • 细胞转染孵育时勿用含 FBS 的培养基,FBS 会严重影响转染效果;

    • Gentle AP30 转染试剂不建议剧烈涡旋,推荐用移液器温和反复吹打混匀。

  6. 内置阳性对照品怎么使用?

    • 设置阳性对照时,GFP mRNA 按照上述表格中的 mRNA 使用量进行实验即可。

  7. 实验中离心可能出现的问题?

    • 本文中离心程序设置均为室温,300g,5 分钟;

    • 转染结束时,EP 管离心后未看到细胞沉淀是正常现象,因细胞量较少;

    • 转染结束后,可加入 1mL 完全培养基轻吹混匀,终止转染的同时去除转染试剂对细胞离心的影响。(转染试剂轻微粘稠属于正常现象)


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其他说明

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