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Cat. Number
EH03401
Chemical Name
EH03401 T4噬菌体基因32编码蛋白(gp 32) T4 gene 32 Protein
Qty 1
5mg
Qty 2
25mg
References

T4噬菌体基因32编码蛋白(gp 32) T4 gene 32 Protein 来源于T4噬菌体,属于单链DNA结合蛋白家族,是T4噬菌体的一种单链DNA结合蛋白,在RPA技术中发挥辅助作用。T4 gene32蛋白具有三个OB折叠结构域,可识别并与单链DNA forma化学键结合,但与双链DNA的结合力较弱。T4 gene32蛋白是RPA技术实现等温扩增的一种辅助因子。它可保护单链DNA,促进引物退火,并与其他关键酶协同作用,提高RPA反应的效率与灵敏度,实现低丰度核酸的快速检测。

T4 gene 32蛋白由E.coli表达的重组蛋白,是将蛋白基因接入稳定表达载体,经克隆筛选,质量验证,挑选的稳定表达株,由化学成分确定的培养基(不含有任何动物源成分)发酵制备,工艺稳定,保证了产品质量及批次间的一致性。


规格参数:

货号:EH03401 

规格:250ug/5mg/20mg     

为工业客户提供g级。


质量控制:

纯      度: 经高效液相色谱(SEC-HPLC)和SDS-PAGE检测,纯度大于95%.

 

使用说明:

长期储存于-80℃,首次使用后保存于-20℃,避免反复冻融。


工作机理:

T4 gene32蛋白在RPA反应中的主要作用是:

(1)保护单链DNA

在双链DNA初变性后,T4 gene32蛋白可快速识别并且结合单链DNA,形成稳定的蛋白-DNA复合体,以防止单链DNA的二次结构形成和再次回环。这为后续的引物退火和延伸创造条件。

(2)促进引物退火

T4 gene32蛋白可通过与单链DNA的非特异性结合稳定其构象,使引物更易于与模板退火,这有利于RPA反应的启动。

(3)放置与替换

一旦引物-模板双链体形成并进展到延伸阶段,T4 gene32蛋白被逐渐替换,以露出更多的单链DNA供聚合酶使用。这一替换过程需要消耗一定的能量。

(4)回收利用

在RPA反应结束时,尚未结合的T4 gene32蛋白可被回收利用,这降低了RPA成本,有利于其商业化开发。


作用机制:

T4 gene32蛋白主要通过两种机制发挥作用:

(1)非特异性单链DNA结合

T4 gene32蛋白可快速识别和非特异性地结合单链DNA,以稳定其构象和防止回环。

(2)与其他蛋白的协同作用

T4 gene32蛋白还可与T4 UvsX Recombinase、T4 UvsY蛋白发生相互作用,协同地发挥作用,如促进引物退火和加速替换等,提高RPA反应的效率。


T4 gene32蛋白是RPA技术中主要应用如下:

1. 提高RPA反应效率

T4 gene32蛋白可保护单链DNA,促进引物退火,并与其他关键酶协同作用,这可提高RPA反应的效率和灵敏度,实现更高效的等温扩增。

2. 商业RPA试剂盒

一些商业RPA试剂盒中的单链DNA结合蛋白成分包含T4 gene32蛋白,如TwistDx的Recombinase Polymerase Amplification kit等。这可提高试剂盒的性能和灵敏度。

3. 低丰度靶核酸检测

T4 gene32蛋白的作用可提高RPA技术对低丰度DNA/RNA的检测灵敏度,满足某些样本极低浓度下的检测需求。

4. 实现细胞核内检测

T4 gene32蛋白保护的单链DNA更易于T4 UvsX Recombinase识别和结合,这有利于实现RPA对细胞核内DNA和RNA的检测。

5. 病原体低丰度快速检测

联合使用与特定病原体高度同源的引物,T4 gene32蛋白及RPA技术可实现病原体极低丰度的快速检测,应用于某些病原体感染的诊断,如病毒感染的诊断。

6. 微生物快速检测

设计与特定微生物同源的引物,联合T4 gene32蛋白及RPA技术,可实现相关微生物DNA/RNA的快速检测,满足环境监测、食品安全等领域的需求。

7. miRNA快速检测

利用与特定miRNA高度同源的引物,联合T4 gene32蛋白及RPA技术,可实现细胞miRNA的快速灵敏检测,满足miRNA功能研究与开发miRNA生物标记物的需求。

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