服务热线
021-60498804
您的位置：
Crispr Cas12a切割原理和特点
Crispr cas12a是一种可编程的DNA内切酶，它可以根据crRNA的设计实现对不同DNA的精确识别与切割。在靶DNA的指导下，Cas12a核酸酶域会被激活并进行DNA内切，实现了对靶DNA的高效识别和放大。这一原理使其可以作为DNA诊断工具，crRNA的设计决定了其特异性。但Cas12a附带切割效应也使非特异性信号放大成为可能，这需要在应用中加以考量。Cas12a的深入研究将有助于理解DNA内切机制，也为工程化DNA工具的开发提供基础。
Cas12a主要特点
1.来源:
cas12a来源于微生物的CRISPR-Cas免疫系统，是其中一种type V CRISPR系统中的效应分子。
2. 结构:
cas12a是一个多功能蛋白，包含RNA结合域、核酸酶域和DNA结合域。其中核酸酶域具有DNA内切酶活性，可以在激活后非特异性地切割DNA。
3. 指导RNA:
cas12a需要与crRNA结合才具有活性，crRNA与其靶DNA互补的序列决定了cas12a的识别靶向性。多个crRNA可以共同作用于一个cas12a。
4. 活性调控:
在结合crRNA前，cas12a处于不活性状态。只有当crRNA完全与靶DNA退火时，其核酸酶域才会被激活，对DNA进行内切。这实现了对其活性的精确控制。
5. DNA内切:
激活后的cas12a会首先在靶DNA的crRNA结合位点产生双链断裂，切出一段DNA片段；然后会对周围DNA进行非特异性切割，产生较短DNA片段。这实现了对靶DNA的内切和信号放大。
6. 自身调控:
cas12a在激活后也会逐渐失去活性，这在一定程度上限制了其非特异性DNA内切的范围。但在DNA浓度高的条件下，仍可能产生较大范围的非特异性切割。
7. 应用:
cas12a可用于DNA的高灵敏度检测、基因编辑、转基因等应用。crRNA设计决定了其靶向性，继而影响其应用效果。但非特异性切割也需要在应用设计中加以控制。
Cas12a切割机理如下:
1. cas12a是一个多功能蛋白，含有双链DNA结合域和核酸酶域。其中核酸酶域具有DNA内切酶活性，可以非特异性切割DNA。
2. crRNA是处理过的RNA分子，含有与靶DNA互补的序列，可以特异性识别靶DNA。多个crRNA可以成簇，以提高靶向效率。
3. 在不存在靶DNA的情况下，cas12a的核酸酶活性是抑制的。crRNA与cas12a结合后，也不会激活其酶活性，维持不活性状态。
4. 当crRNA结合的cas12a与靶DNA发生碱基配对时，cas12a的核酸酶域会被激活，对周围的DNA分子进行非特异性切割。这被称为collateral cleavage效应。
5. 一旦被激活。cas12a会持续进行DNA内切割。直到周围没有可以被切割的DNA。这可以放大信号。增强检测灵敏度。
6. 激活后的cas12a也会被降解。这可以在一定程度上限制collateral cleavage效应。但在DNA丰富的条件下。仍可能产生较大范围的附带切割。
7. 利用这一原理。可以通过检测collateral cleavage产生的DNA片段来判断靶DNA是否存在。实现DNA的检测。这提供了高灵敏度和内切的DNA检测手段。
相关RPA原料：
EH03201 Bst DNA聚合酶 Bst DNA polymerase
EH04801 核酸外切酶 IV Exonuclease IV
EH04701 核酸外切酶 III Exonuclease III
EH02501 M-MuLV反转录酶 M-MuLV Reverse Transcriptase
EH03301 Bsu DNA聚合酶大片段 Bsu DNA polymerase, Large Fragment
EH04501 重组肌酸激酶(CK) Creatine Kinase
EH03501 T4 UvsX重组酶 T4 UvsX Recombinase
EH03401 T4噬菌体基因32编码蛋白(gp 32) T4 gene 32 Protein
EH03601 T4 UvsY蛋白 T4 UvsY Protein
HM0058 重组鼠源RNase抑制剂(40 U/µL) RNase Inhibitor
相关探针产品推荐：
HC80202-01 Crispr Cas12a检测系统用荧光双标记探针（DNA荧光-淬灭双标记） 1OD/950元
HC80202-02 Crispr Cas13a检测系统用荧光双标记探针（RNA荧光-淬灭双标记） 1OD/950元
HC80202-03 Crispr Cas13a检测系统用双标记探针（RNA Biotin和FAM双标记） 1OD/1350元
HC80202-04 Crispr Cas12a检测系统用双标记探针（DNA Biotin和FAM双标记）1OD/1150元
HC80202-05 Cas14a检测系统用荧光双标记探针（DNA荧光-淬灭双标记）1OD/950元
HC80202-06 Cas14a检测系统用双标记探针（DNA Biotin和FAM双标记）1OD/1150元
RAA/RPA试剂盒推荐：
HP80206 试纸条型RT-RAA核酸扩增试剂（冻干颗粒）
HP90206-48 RT-RAA核酸扩增试剂盒(试剂条法)
相关Crispr/cas酶：
其他相关蛋白产品：
SARS-CoV-2 (2019-nCoV) Spike Protein (S1 Subunit, His Tag)
SARS-CoV-2 (2019-nCoV) Spike Protein (RBD, mFc Tag)
重组TEV蛋白酶 Recombinant TEV Protease
重组SUMO蛋白酶 Recombinant SUMO Protease
上海惠诚生物科技有限公司自2010年成立以来，一直致力于为客户提供试剂，仪器设备和耗材一站式服务。目前在苏州和南通的研发生产基地，专注于体外诊断蛋白，靶标蛋白，工业用酶和细胞因子的生产和定制，按照GMP标准，为工业客户提供大包装蛋白原料。
更多产品请联系惠诚生物！
蛋白原料网站：www.acediag.com
全国统一服务热线：021- 60496554
24小时手机服务: 13917250134（同微信）QQ：1715451510
Email：info@e-biochem.com
Copyright © 2022 上海惠诚生物科技有限公司
沪ICP备2021037845号-6
