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| Cat. Number | 81075-001/P688293 |
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| Chemical Name | 奥浦迈培养基 81075-001/P688293 液体/干粉OPM-293 CD05 化学成分确定 HEK293 细胞培养基，用于生物制药研发及生产 |
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| Qty 1 |
1000ml |
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| Qty 2 | 10L |
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| Appearance | 红色透明液体 |
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| Storage condition | 2~8℃冷藏，干燥避光保存 |
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| References | OPM-293 CD05 是完全化学成分确定（Chemically-defined）的培养基，不含水解物、蛋白、生长因子及任 何动物来源的成分，适合于各种亚型 HEK293 细胞的高密度培养及高效率瞬时转染。 订购信息： 基础培养基
补料培养基
其他 HEK293 系列培养基
应用范围 OPM-293 CD05 即适用于科研应用，也适用于基于细胞培养的大规模生物药生产，但不可直接用于人体或作为药 物使用。 储存运输方法 储存：2~8℃冷藏，干燥避光保存 运输：常温（液体）、冷藏（干粉） 液体培养基配制方法 1. 取洁净的配制容器，建议一次性配制体积不低于 1L； 2. 加入最终配制体积 90%的超纯水或注射用水，水温控制在 25~35°C； 3. 称量 19.86g/L 干粉培养基，缓慢加入水中搅拌 10 分钟； 4. 称量 2.22g/L 碳酸氢钠，加入水中搅拌； 5. 缓慢加入 5N NaOH 调节 pH 到 8.3~8.5，搅拌 30 分钟，此时应完全溶解； 6. 缓慢加入 5N HCl 将 pH 调回至 7.0； 7. 定容到最终配液体积，继续搅拌 5 分钟，测 pH，用 5N NaOH 或 5N HCl 将 pH 调回至 7.0； 8. 取样测渗透压，加入 NaCl 调节渗透压至 275±10mOsm/kg（渗透压计算公式：NaCl 添加量（g）=配液体积 （L）*（275-检测值）/31.5）； 9. 继续搅拌 10 分钟，无菌过滤到合适容器，2~8℃避光保存。 干粉及液体培养基质量指标
培养条件 温度 37℃，湿度 80%，5~8%CO2 摇床设置：转速 115~125rpm（振幅 50mm） 细胞复苏 1. 在 37℃水浴中快速（＜2min）融化冷冻的细胞； 2. 将冷冻管中的细胞液全部转移到含有 30mL 预温过的 OPM-293 CD05 培养基的 125mL 摇瓶中； 3. 放入 37℃，5~8% CO2，转速 115~135rpm（振幅 50mm），湿度 80%的摇床中培养 细胞传代 1. 将 OPM-293 CD05 培养基放入 37℃条件下预热 20-30min。 2. 取细胞密度≥3×10 6 ~ 4×10 6cells/mL、活率≥95%、处于对数生长期中期的细胞进行传代；注意：不同类 型的 HEK293 细胞可能具有不同的对数生长期范围。 3. 按接种密度为 0.3×10 6 ~ 0.6×10 6cells/mL。 4. 无菌转移所需量的种子液至合适体积的摇瓶中，并添加所需体积的已预热的 OPM-293 CD05 培养基。 5. 将摇瓶放入温度 37℃，湿度 80%，转速 110-150rpm（振幅 50mm），5%~8%CO2的细胞培养摇床中进行培养。 *每 2~3 天用新鲜的培养基按上述步骤进行传代培养。 细胞驯化 直接接种法 1. 对于可以直接驯化的细胞，可以从无血清培养基中直接接种到 OPM-293 CD05 培养基中，接种密度参考传 代步骤。 2. 继续传代细胞，直到细胞稳定生长。 3. 传代几代之后，细胞密度在接种的 3~4 天内达到 3×10 6cells/mL、细胞活性≥95%。此时，可以认为细胞 已被驯化成功。
梯度驯化法 1. 如果直接驯化效果不佳，请尝试按照以下梯度驯化表格进行操作。 2. 选择低代次的细胞，并确保细胞处于对数期。 3. 使用原始培养基培养细胞，并继续使用原始培养基传代 2~3 代，以实现稳定的细胞生长。 4. 在完全使用 OPM-293 CD05 培养基接种 3~4 天之后，VCD 应该稳定达到 3×10 6cells/mL，细胞活性≥95%。 此时，细胞已经驯化到 OPM-293 CD05 培养基中。 转染和瞬时表达 转染条件应根据具体情况进行优化，可能需要通过 DOE 方法确定。以下转染条件仅供参考
推荐的补料添加方案
推荐转染流程
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