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| Cat. Number | HK21293-96S |
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| Chemical Name | HK21293-96S 过氧化物酶(POD)测试盒(酶标板法) |
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| Qty 1 |
100T/96S |
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| References | 过氧化物酶POD（EC 1.11.1.7）广泛存在于动物、植物、微生物中，可催化过氧化氢氧化酚类和胺类化合物，具有消除
过氧化氢和酚类、胺类毒性的双重作用。 检测原理： POD 在有过氧化氢存在的情况下，能使愈创木酚发生氧化，生成茶褐色 物质，该物质在 470nm 有最大光吸收。 需自备的仪器和用品: 可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。 产品组成：
实验步骤: 注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。 一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献) 1、细菌、细胞或组织样本的制备 细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清;按照细菌或细胞数量（104个)∶提取液体积(mL)为500~1000: 1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL 提取液)，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率200W，超声3s，间隔10s，重复30次)；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。 组织：按照组织质量(g)：提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液)，进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。 2、血清（浆）样本：直接检测。 二、试剂准备 1、试剂R2：液体置于试剂瓶内EP管中，使用前需先离心。 2、试剂R2工作液：取0.01mL试剂R2加入3.2 mL试剂R1混合备用(约106T)，现配现用，也可根据样本量按比例配制。 三、测定步骤 1、分光光度计或酶标仪预热30min 以上，调节波长至470nm，蒸馏水调零。 2、测定前将试剂R1、R2和R3在37℃（哺乳动物）或25℃(其它物种）放置10min 以上。 3、样本测定表
在EP管中按顺序加入上述试剂，立即混匀并计时，立即取200uL转移至微量玻璃比色皿或96孔板中，记录470nm下 30s 时的吸光值A1和 1min30s后的吸光值A2。计算△A=A2-A1。 四、POD活性计算 a、用微量玻璃比色皿测定的计算公式如下 1、按血清（浆）体积计算 单位定义：每mL血清（浆）在每mL反应体系中每分钟A470变化0.01定义为一个酶活力单位。 POD (U/mL） =△A÷0.01×V反总÷V样÷T 2、按样本蛋白浓度计算 单位定义：每mg组织蛋白在每mL反应体系中每分钟A470变化0.01定义为一个酶活力单位。 POD (U/mg prot）=△A÷0.01×V反总÷(Cpr×V样）÷T 3、按样本质量计算 单位定义：每g组织在每mL反应体系中每分钟A470变化0.01定义为一个酶活力单位。 POD (U/g 质量）=△A÷0.01×V反总÷(W÷V样总xV样）÷T 4、按细菌或细胞数量计算 单位定义：每1万个细菌或细胞在每mL反应体系中每分钟A470变化0.01定义为一个酶活力单位。 POD (U/104cell） =△A÷0.01×V反总÷（500÷V样总×V样）÷T b、用96孔板测定的计算公式如下 1、按血清（浆）体积计算 单位定义：每mL血清（浆）在每mL反应体系中每分钟A470变化0.005定义为一个酶活力单位。 POD (U/mL) =△A÷0.005×V反总÷V样÷T 2、按样本蛋白浓度计算 单位定义：每mg组织蛋白在每mL反应体系中每分钟A470变化0.005定义为一个酶活力单位。 POD (U/mg prot）=△A÷0.005×V反总÷(Cpr×V样）÷T 3、按样本质量计算 单位定义：每g组织在每mL反应体系中每分钟A470变化0.005定义为一个酶活力单位。 POD (U/g质量）=△A÷0.005×V反总÷(W÷V样总×V样）÷T 4、按细菌或细胞数量计算 单位定义：每1万个细菌或细胞在每mL反应体系中每分钟A470变化0.005定义为一个酶活力单位。 POD (U/104 cel1） =△A÷0.005×V反总÷(500÷V样总×V样)÷T V反总：反应体系总体积; V样：加入样本体积; V样总：加入提取液体积; T：反应时间，1min; Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL; W：样本质量，g; 500：细菌或细胞总数，500万。 注意事项: 1、如一次测定的样本数量较多，可将试剂R1、R2、R3和蒸馏水按照比例混合，在37℃（哺乳动物)或25℃（其它物种）放置10min，测定时加入240uL即可。 2、样本测定值如果小于0.005，可将反应时间延长到3-5分钟，计算时除以反应时间即可；如果高于0.8或者反应液中有较多气泡产生，可将样本用提取液进行稀释。计算时乘以相应的稀释倍数即可。 本试剂盒仅供科研使用! |
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