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| Cat. Number | HK21227-96S |
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| Chemical Name | HK21227-96S 单胺氧化酶(MAO)测试盒(酶标板法) |
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| Qty 1 |
100T/96S |
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| References | 单胺氧化酶MAO (EC1.4.3.4）包括MAO-A和 MAO-B，是一种结合在线粒体外膜上的黄素蛋白，可催化神经递质和生物胺氧化脱氨。单胺氧化酶与机体老化有关，被认为是衰老的标志，其主要存在于脊椎动物的各种器官，特别是分泌腺、脑、肝脏，在无脊椎动物、豆类的芽等植物中也存在催化单胺类物质代谢，含量较低，具有重要的生理功能。 测定原理： MAO催化单胺类底物脱氨生成相应的醛，进一步氧化成酸；底物在360nm处有特征吸收峰，测定360nm光吸收下降的速率，计算MAO活性。 需自备的仪器和用品: 紫外分光光度计/酶标仪、低温离心机、水浴锅/恒温培养箱中、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔UV板、震荡仪、蒸馏水。 产品组成：
实验步骤: 注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。 一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献) 1、临用前根据实验用量取出部分提取液1、提取液2和试剂R1置于4℃预冷30min。 2、组织样本：按照样本质量(g)∶提取液1体积(mL)为1:5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液1）加入提取液1，冰浴匀浆；1000g 4℃离心10min，取上清，将上清液转移至预冷的离心管，于10000g，4℃离心30min。弃上清，沉淀中加入1mL预冷的提取液2，振荡混匀，于16000g，4℃离心40min，弃上清，加入1mL试剂R1，振荡混匀，置冰上待测。 3、细菌或细胞样本：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清，按照细菌或细胞数量(104个)：提取液1体积（mL）为500~1000:1的比例（建议 500 万细菌或细胞加入1mL提取液1)加入提取液1，超声破碎细菌或细胞（冰浴，功率200W，超声3s，间隔7s，总时间3min), 1000g，4℃离心10min，取上清，将上清液转移至预冷的离心管，于10000g，4℃离心30min。弃上清，沉淀中加入1mL预冷的提取液2，振荡混匀，于16000g，4℃离心40min，弃上清，沉淀中加入1mL试剂R1，振荡混匀，置冰上待测。 4、 血清（浆）或液体样本：直接检测。若溶液浑浊则离心后取上清进行测定。 二、测定步骤 1、紫外分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至360nm，分光光度计用蒸馏水调零。 2、加样表（在微量石英比色皿/96孔UV板中依次加入下列试剂)：
三、MAO活力的计算 a．用微量石英比色皿测定的计算公式如下: 1、按样本蛋白质浓度计算 酶活定义：37℃，pH7.6条件下，每mg组织蛋白每分钟消耗1nmol底物的酶量定义为一个酶活单位。 MAO活性（U/mg prot）=△A÷ɛ÷d×V反总×109÷(V样×Cpr)÷T 2、按样本质量计算 酶活定义:37℃，pH7.6条件下，每mg组织每分钟消耗1nmol底物定义的酶量为一个酶活单位。 MAO活性(Ulg 质量)=△A÷ɛ÷d×V反总×109÷(V样÷V样总×W)÷T 3、按细菌/细胞数量计算 酶活定义:37C，pH7.6条件下，每10+细菌/细胞每分钟消耗1nmol底物的酶量定义为一个酶活单位。 MAO活性(U/104 cell)=△A÷ɛ÷d×V反总×109÷(V样÷V样总x细胞数量)÷T 4、按照样本体积计算 酶活定义：37℃，pH7.6条件下，每mL血清或液体样本每分钟消耗lnmol底物的酶量为一个酶活单位。 MAO活性（U/mL) =△A÷ɛ÷dxV反总×109÷V样÷T ɛ：底物摩尔消光系数:1460L/molcm； d：比色皿光径，1cm； V反总：反应总体积； V样：加入样本体积； V样总:提取液体积； Cpr:样本蛋白质浓度，mg/mL; W:样本质量，g； T:反应时间，120min; 109：单位换算系数，1mol=109nmol。 b.用96孔UV板测定的计算公式如下: 1、按样本蛋白质浓度计算 酶活定义：37℃，pH7.6条件下，每mg组织蛋白每分钟消耗1nmol底物的酶量定义为一个酶活单位。 MAO (U/mg prot）=△A÷ɛ÷dxV反总×109÷(V样×Cpr)÷T 2、按样本质量计算 酶活定义：37C，pH7.6条件下，每g组织每分钟消耗1nmol底物的酶量定义为一个酶活单位。 MAO (U/g质量）=△A÷ɛ÷dxV反总×109÷(V样÷V样总×W)÷T 3、按细菌/细胞数量计算 酶活定义：37℃，pH7.6条件下，每104细菌/细胞每分钟消耗1nmol底物的酶量定义为一个酶活单位。 MAO (U/104 cell）)=△A÷ɛ÷dxV反总×109÷(V样÷V样总×细胞数量)÷T 4、按照样本体积计算 酶活定义：37℃，pH7.6条件下，每mL血清或液体样本每分钟消耗lnmol底物的酶量为一个酶活单位。 MAO 活性(nmol/min/mL) =△A÷ɛ÷dxV反总×109÷V样÷T ɛ：底物摩尔消光系数: 1460L/mol/cm; d：比色皿光径，0.6cm; V反总：反应总体积; V样：加入样本体积； V样总：提取液体积; Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL; W：样本质量，g; T：反应时间，120min; 109：单位换算系数，1mol=109nmol。 本试剂盒仅供科研使用! |
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