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Cat. Number

HK21226-48S

Chemical Name

HK21226-48S 单胺氧化酶测试盒(可见分光光度法)

Qty 1

50T/48S

References

单胺氧化酶MAO (EC1.4.3.4）包括MAO-A和 MAO-B，是一种结合在线粒体外膜上的黄素蛋白，可催化神经递质和生物胺氧化脱氨。单胺氧化酶与机体老化有关，被认为是衰老的标志，其主要存在于脊椎动物的各种器官，特别是分泌腺、脑、肝脏，在无脊椎动物、豆类的芽等植物中也存在催化单胺类物质代谢，含量较低，具有重要的生理功能。

测定原理：

MAO催化单胺类底物脱氨生成相应的醛，进一步氧化成酸；底物在360nm处有特征吸收峰，测定360nm光吸收下降的速率，计算MAO活性。

需自备的仪器和用品:

紫外分光光度计、低温离心机、水浴锅/恒温培养箱中、可调式移液器、1mL石英比色皿、震荡仪、蒸馏水。

产品组成：

试剂名称	规格	保存条件
提取液1	液体×1瓶	2-8℃
提取液2	液体×1瓶	2-8℃
试剂R1	液体×3瓶	2-8℃
试剂R2	液体×1瓶	2-8℃

实验步骤:

注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献)

1、临用前根据实验用量取出部分提取液1、提取液2和试剂R1置于4℃预冷30min。

2、组织样本：按照样本质量(g)∶提取液1体积(mL)为1:5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液1）加入提取液1，冰浴匀浆；1000g 4℃离心10min，取上清，将上清液转移至预冷的离心管，于10000g，4℃离心30min。弃上清，沉淀中加入1mL预冷的提取液2，振荡混匀，于16000g，4℃离心40min，弃上清，加入1mL试剂R1，振荡混匀，置冰上待测。

3、细菌或细胞样本：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清，按照细菌或细胞数量(104个)：提取液1体积（mL）为500~1000:1的比例（建议 500 万细菌或细胞加入1mL提取液1)加入提取液1，超声破碎细菌或细胞（冰浴，功率200W，超声3s，间隔7s，总时间3min), 1000g，4℃离心10min，取上清，将上清液转移至预冷的离心管，于10000g，4℃离心30min。弃上清，沉淀中加入1mL预冷的提取液2，振荡混匀，于16000g，4℃离心40min，弃上清，沉淀中加入1mL试剂R1，振荡混匀，置冰上待测。

4、血清（浆）或液体样本：直接检测。若溶液浑浊则离心后取上清进行测定。

二、测定步骤

1、紫外分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至360nm，分光光度计用蒸馏水调零。

2、加样表（在微量石英比色皿/96孔UV板中依次加入下列试剂)：

试剂名称（uL）	测定管	空白管
样本	100	-
试剂R1	800	800
试剂R2	100	100
将上述试剂分别加入1mL石英比色皿中，迅速吹打混匀，分别测定360nm处第10s的吸光值，记为A测定管1、A空白管1；然后置于37℃水浴锅/恒温培养箱中准确反应2h，测定360nm处吸光值，记为A测定管2、A空白管2，计算△A测定=A测定管1-A测定管2，△A空白=A空白管1-A空白管2。△A=△A测定-△A空白。空白管只需测1-2次。

三、MAO活力的计算

1、按样本蛋白质浓度计算

酶活定义：37℃，pH7.6条件下，每mg组织蛋白每分钟消耗1nmol底物的酶量定义为一个酶活单位。

MAO活性（U/mg prot）=△A÷ɛ÷d×V反总×10⁹÷(V样×Cpr)÷T

2、按样本质量计算

酶活定义:37℃，pH7.6条件下，每mg组织每分钟消耗1nmol底物定义的酶量为一个酶活单位。

MAO活性(Ulg 质量)=△A÷ɛ÷d×V反总×10⁹÷(V样÷V样总×W)÷T

3、按细菌/细胞数量计算

酶活定义:37C，pH7.6条件下，每10+细菌/细胞每分钟消耗1nmol底物的酶量定义为一个酶活单位。

MAO活性(U/10⁴ cell)=△A÷ɛ÷d×V反总×10⁹÷(V样÷V样总x细胞数量)÷T

4、按照样本体积计算

酶活定义：37℃，pH7.6条件下，每mL血清或液体样本每分钟消耗lnmol底物的酶量为一个酶活单位。