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| Cat. Number | HA31017 |
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| Chemical Name | HA31017 磁珠法去内毒素质粒DNA大量抽提试剂盒 (900-1000mL)用于质粒提取 |
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| Qty 1 |
20次 |
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| References | 磁珠法去内毒素质粒DNA大量抽提试剂盒 (900-1000mL) 【货号】 HA31017 【产品名称】 磁珠法去内毒素质粒DNA大量抽提试剂盒 (900-1000mL) 【规格】 20次 【产品描述】 本试剂盒可应用于对大量菌液进行质粒DNA抽提。试剂盒采用高性能纳米磁珠和特殊缓冲液系统。磁珠在一定条件下对质粒DNA具有极强的亲和力，当条件改变时可以可逆的释放质粒DNA，从而达到分离纯化质粒DNA的效果。本产品可最大限度的去除蛋白质等杂质，保证提取所得质粒DNA的纯度，同时采用特殊的去内毒素系统，可有效的去除内毒素，操作简单方便，可同时操作多个样品，从而大大节约时间。所得质粒DNA产物可直接应用于酶切、测序、文库筛选、连接和转化等各种下游分子生物学实验。 推荐每次菌液使用量：高拷贝质粒推荐使用量为50ml，低拷贝质粒推荐使用量为100ml。 本试剂盒可在EP管中进行手动法操作，或者与自动化核酸提取仪配合使用实现自动化高通量操作。 【试剂盒组成】
【贮存条件】 组分①-⑦于2～8℃保存；组分⑧于-20℃保存。 【实验步骤】 一、试剂准备 1、将组分⑧RNase A酶溶液全部加入组分①P1 buffer中，混匀，放置4℃保存备用； 2、在组分⑤Binding buffer中加入135mL无水乙醇，混匀，室温保存备用； 3、在组分⑥Wash buffer中加入600mL无水乙醇，混匀，室温保存备用。 二、操作步骤 1. 样品准备 a) 过夜培养的菌液，转移50 mL至离心管中，在离心机的水平转子上4000rpm离心10-15min， 尽弃上清。 b) 将5mL P1 Buffer加入至上述离心管，菌体充分悬浮。 注意：使用前请添加RNase 到P1 Buffer。 c) 加5mL P2 Buffer到已悬浮好的菌液中，缓慢摇动混合均匀（不能剧烈震荡），进行裂解。 注意：操作时间不能超过5min，防止基因组污染。 d) 再向裂解体系中加入7mL P3 Buffer，缓慢摇动混合均匀（不能剧烈震荡），出现絮状物沉淀。 e) 将中和后的50mL离心管在离心机的水平转子上4000rpm离心30-40min。 f) 取出离心后的50mL离心管，转移15mL上清至新的50mL离心管中。 2. 去内毒素 a) 向上述离心管中加入1.6 mL ER buffer，上下颠倒混匀，冰上孵育30 min，期间不断的混匀， 56℃孵育10 min。 b) 12000g，25℃离心15 min，取15 mL上层水相于新的离心管中。 c) 可重复1-2次。 3. 质粒抽提 a) 添加2.5mL磁珠至上述新的50 mL离心管中，完成后再加入17.5mL的Binding buffer至新的50 mL离心管中。 b) 放置旋转架上，孵育10 min，放置磁力架上，静置1-2 min，尽弃上清。 c) 加入40 mL Washbuffer至新的50 mL离心管中，放置旋转架上，孵育1min。重复1-2次。 d) 放置磁力架上，静置1-2 min，尽弃上清。放置37℃培养箱 10-30 min，直到磁珠中酒精蒸发完全。 e) 加入1mL无菌水溶解，孵育3-5 min。放置磁力架上，静置1-2 min，转移上清之EP管中。再 次加入0.5 mL无菌水溶解，混匀后孵育2 min，放置磁力架上，静置1-2 min，转移上清之新的EP管中。再次加入 0.25 mL无菌水溶解，混匀后孵育2 min，放置磁力架上，静置1-2 min，转移上清之新的EP管中。 注意：根据每个管的质粒浓度，看看是否合并。 f) 使用分光光度计检测质粒浓度。 【注意事项】 1. 试剂时间长可能会出现沉淀，使用前轻轻摇晃混合均匀。也可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解，恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。 2. 磁珠使用前充分摇匀。RNase保存在-20℃。试剂盒其他成分置于常温保存。 3. Buffer P1加入后一定要充分悬浮细菌，要保证看不到结块的菌，否则细菌不易被裂解，质粒产量会显著下降。 4. Buffer P2是否有沉淀。如有沉淀可用水浴（37℃）加热溶解，混匀后使用。 5. 基因组污染：Buffer P2和P3加入后轻轻摇晃，防止基因组断裂。 更多优惠产品请联系惠诚生物。 全国统一服务热线：021- 60496554 24小时手机服务: 13917250134（同微信） QQ：1715451510 Email：info@e-biochem.com |
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