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Cat. Number
HK21645-48S
Chemical Name
HK21645-48S 组织总磷含量测试盒(可见分光光度法)
Qty 1
50T/48S
References

磷的存在形态包括无机磷与有机磷。无机磷主要指磷酸根,参与生物体内多种代谢,包括能量代谢、核酸代谢、蛋白质磷酸化和脱磷酸化等。通过测定总磷与无机磷含量即可了解作物对磷的利用率,进而为合理施肥提供依据。 


测定原理:

总磷经消化后,转化成无机磷。钼蓝法是测定无机磷含量的经典方法,使磷在酸性条件下与钼酸铵结合生成磷钼酸铵。此化合物经对苯二酚、亚硫酸钠还原成兰色化合物--钼蓝,通过测定660nm光吸收,即可计算磷含量,进而可计算出组织中总磷含量。 


需自备的试剂和器材: 

可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液枪、1mL玻璃比色皿、蒸馏水和浓硫酸(99%)。


产品组成:

试剂名称规格保存条件
试剂R1液体×1 瓶2-8℃保存
试剂R2液体×1 瓶2-8℃保存
试剂R3A粉体×1 瓶2-8℃保存
试剂R3B粉体×1 瓶2-8℃保存
标准品液体×1 支2-8℃保存


实验步骤: 

一、有机磷消化(具体比例可以参考文献) 

 称取约 0.1 g 组织于带盖试管中,加浓硫酸 1.0 mL,盖紧(封口膜封口,防止水分散失)后沸水浴 10min 左右, 待溶液呈黑色或棕色时取出。稍冷后,加试剂R1 200μL,充分混匀,盖紧后继续沸水浴,直到溶液呈透明状,取 出室温冷却后,加蒸馏水 3.8 mL,充分混匀;室温,10000rpm,离心 10min,取上清液,待测。 

二试剂准备

1、试剂R1:强腐蚀性,强氧化性;易挥发,不使用时请及时盖紧盖子;

2、试剂R3A:临用前加入10mL蒸馏水溶解,用不完的试剂2-8℃保存4周;

3、试剂R3B:临用前加入10mL蒸馏水溶解,用不完的试剂2-8℃保存4周;

4、试剂R3:临用前按试剂R3A:试剂R3B:试剂R2=1:1:1的体积比例配制,配好的试剂R3应为浅黄色。若无色则试剂失效,若是蓝色则为磷污染,试剂三根据样本量现用现配,限当天使用。

5、标准品: 1mmolL无机磷标准液。

三、测定步骤 

1、分光光度计预热 30 min 以上,调节波长到 660 nm,蒸馏水调零。

2、打开水浴锅,调节温度到 40℃。 

3、样本测定

试剂名称(μL) 空白管 标准管测定管
标准液-50-
上清液--50
蒸馏水500450450
试剂R3500500500

混匀后置于 40℃水浴保温 10min,室温冷却 10 min 后于 660 nm 测定吸光度,分别记为 A 空白管、A 标准管、A 测定管。 (空白管和标准管只需测 1-2 次)。

四、组织总磷含量计算 

总磷含量(mmol/g 质量)= [C 标准液×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)]×V 总÷W

C 标准液:标准溶液浓度;

V 总:上清液总体积;

W:样本质量,g。


注意事项: 

1、如果样本测定吸光值大于0.8,需用蒸馏水做相应稀释后进行测定。如果样本测定吸光值较低或接近空白值,建议增大样本量后重新进行测定。注意同步修改计算公式。


本试剂盒仅供科研使用!


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