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Cat. Number

HK21311-24S

Chemical Name

HK21311-24S 几丁质酶测试盒(可见分光光度法)

Qty 1

50T/24S

References

几丁质酶主要存在于虾、蟹、昆虫等甲壳类动物的外壳与软体动物的器官（例如乌贼的软骨），以及真菌类的细胞壁中。而几丁质酶（EC 3.2.1.14）可催化几丁质水解，具有抵御真菌侵染的作用，成为抗真菌病害的研究热点。

测定原理：

几丁质酶水解几丁质产生N-乙酰氨基葡萄糖，N-乙酰氨基葡萄糖与碱共热产生的中间化合物可进一步与对二甲氨基苯甲醛反应产生显色物质，该显色物质在585nm处有特征吸收峰,吸光值增加速率反映了几丁质酶的活性。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、低温离心机、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液枪、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器/细胞超声破碎仪、冰和蒸馏水。

产品组成：

实验步骤：

注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1、组织:按照组织质量(g)：提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液)进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心20min，取上清，置冰上待测。

2、细菌或细胞：收集细菌或细胞到离心管内，弃上清，按照每500万细菌或细胞加入lmL提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率200W，超声3s，间隔10s，重复30次)，10000g，4℃离心20min，取上清，置冰上待测。

3、液体：直接测定(若溶液呈现浑浊，则离心取上清后再测定)。

二、试剂准备

1、试剂R2：此试剂为悬浊液，使用前需摇匀;

2、试剂R3：此试剂为饱和溶液，低温（2-8°℃)）条件取出会有晶体析出，60C加热使其溶解即可;

3、试剂R4：临用前取一瓶试剂R4A，加入32mL试剂R4B中，充分溶解，现用现配。用不完的试剂2-8°C可以保存4周;

4、标准品：5mg N-乙酰氨基葡萄糖。临用前加入1mL试剂R1配制成5mg/mL 的标准溶液，即 5000ug/mL的标准溶液，2-8C可以保存4 周。

三、测定步骤

1、分光光度计预热30min以上，调节波长到585nm，蒸馏水调零。

2、标准溶液的制备：将标准品用试剂R1分别稀释为100、80、40、20、10、5、2.5、1.25ug/mL的标准溶液。

3、操作表

试剂名称(uL)	对照管	测定管	空白管	标准管
粗酶液	200	200	-	-
试剂R1	100	100	-	-
试剂R2	200	200	-	-
	37℃酶促反应1小时，沸水浴5min.10000rpm常温离心5min后取上清液		-	-
上清液	250	250	-	-
试剂R1	-	-	250	-
标准液	-	-	-	250
试剂R3	50	50	50	50
	混匀，常温静置5min	混匀，沸水浴5min，流水冷却至常温
试剂R4	750	750	750	750