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Cat. Number

HK21309-96S

Chemical Name

HK21309-96S 肌酸激酶测试盒(酶标板法)

Qty 1

100T/96S

References

肌酸激酶（Creatine Kinase，CK） (EC 2.7.3.2)也成为肌酸磷酸激酶，主要存在于心脏、肌肉以及脑等组织中，能可逆地催化肌酸与ATP之间的转磷酰基反应，是一个与细胞能量运转、肌肉收缩、ATP再生有直接关系的重要激酶。

测定原理：

CK催化磷酸肌酸和ADP生成肌酸和ATP，己糖激酶催化ATP与葡萄糖形成6-磷酸葡萄糖，6-磷酸葡萄糖脱氢酶催化6-磷酸葡萄糖与NADP+生成NADPH，导致340nm光吸收值增加，以此来表示CK酶活。

需自备的仪器和用品：

天平、低温离心机、恒温水浴锅、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔UV板、恒温水浴锅、研钵/匀浆器、蒸馏水。

产品组成：

试剂名称	规格	保存条件
提取液	液体×1 瓶	2-8℃
试剂R1	粉剂×1 瓶	-20℃
试剂R2	粉剂×1 支	-20℃
试剂R3	粉剂×1 支	-20℃
试剂R4	粉剂×1 支	-20℃
试剂R5	液体×1 瓶	2-8℃

实验步骤：

注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1.组织样本：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆，然后10000g，4℃离心15min，取上清，置冰上待测。

2. 血清样本：直接测定。

3. 细胞样本：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液）加入提取液，冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后于4℃，10000g离心10min，取上清待测。

二、试剂准备

1、试剂R1：临用前加5 mL 蒸馏水溶解；用不完的分装后-20℃保存，禁止反复冻融；

2、试剂R2：临用前加入0.5 mL 蒸馏水溶解；用不完的分装后-20℃保存，禁止反复冻融；

3、试剂R3：临用前加入0.5 mL 蒸馏水溶解；用不完的分装后-20℃保存，禁止反复冻融；

4、试剂R4：临用前加入0.65 mL 蒸馏水溶解；用不完的分装后-20℃保存，禁止反复冻融；

5、工作液：临用前根据用量将试剂R1、试剂R2、试剂R3、试剂R4、试剂R5以70:4:7:10:90 的比例混合（体积比）。现用现配。使用前室温孵育20min（该步骤不可省略）。

三、测定步骤

1、分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至340nm，用蒸馏水调零。

2、操作表：在微量石英比色皿/96孔板中加入下列试剂

试剂名称(uL)	空白管	测定管
样本	-	40
工作液	90	90
H2O	110	70
在微量石英比色皿/96孔UV板中分别加入上述试剂，充分混匀后于340nm处测定10s时的吸光值A1，迅速置于37℃水浴或者培养箱3min（有控温功能的酶标仪可以设置唯独为37℃），拿出迅速擦干测定190s时的吸光值A2，计算ΔA测定管= A2测定-A1测定，ΔA空白管=A2空白-A1空白，ΔA=ΔA测定管-ΔA空白管。（空白管只需做1-2次）

四、CK 活性计算

1、按微量石英比色皿计算

(1) 按组织蛋白浓度计算：

酶活定义：37℃，pH7.0时，每毫克蛋白质每分钟催化产生1nmol NADPH为一个酶活单位。

CK活性（U/mg prot）=ΔA÷（ε×d）×V反总×109÷(V样×Cpr) ÷T

(2) 按组织样本质量计算：

酶活定义：37℃，pH7.0时，每克样本每分钟催化产生1nmol NADPH为一个酶活单位。

CK活性（U/g 质量）=ΔA÷（ε×d）×V反总×109÷(V样÷V样总×W) ÷T

(3) 按血清体积计算：

酶活定义：37℃，pH7.0时，每mL血清每分钟催化产生1nmol NADPH为一个酶活单位。

CK活性（U/mL）=ΔA÷（ε×d）×V反总×109÷V样÷T

(4) 按细胞数量计算：