HK21307-96S 黄嘌呤氧化酶(XOD)试剂盒(酶标板法)_上海惠诚生物生物试剂,标准品,仪器设备,耗材,一站式服务

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Cat. Number

HK21307-96S

Chemical Name

HK21307-96S 黄嘌呤氧化酶(XOD)试剂盒(酶标板法)

Qty 1

100T/96S

References

黄嘌呤氧化酶XOD（EC 1.17.3.2）催化次黄嘌呤氧化生成黄嘌呤和超氧阴离子，是活性氧主要来源之一；同时也是核苷酸代谢的关键酶之一。XOD主要分布于哺乳动物的心、肺、肝脏等组织中，当肝功能受损时，XOD大量释放到血清中，对肝损害的诊断具有特异性的意义。

测定原理：

黄嘌呤氧化酶XOD催化次黄嘌呤产生超氧阴离子，超氧阴离子与盐酸羟胺反应生成NO2-，NO2-在对氨基苯磺酰胺和萘乙二胺盐酸盐的作用下，生成紫红色的偶氮化合物，在530nm有特征吸收峰，根据其生成量可反映XOD活性的大小。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、匀浆器/研钵、细胞超声破碎仪、冰和蒸馏水。

产品组成：

试剂名称	规格	保存条件
试剂R1	液体×1瓶	2-8℃
试剂R2	液体×1瓶	2-8℃
试剂R3	液体×1瓶	2-8℃
试剂R4	液体×1瓶	2-8℃
试剂R5	液体×1瓶	2-8℃
试剂R6	液体×1瓶	2-8℃
标准品	液体×1支	2-8℃

实验步骤：

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献)

1.细菌或细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个)：试剂R1体积(mL)为500~1000: 1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL 试剂R1)，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率200W，超声3s，间隔10s，重复30 次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2.组织：按照组织质量(g)∶试剂R1体积(mL)为1:5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂R1)，进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

3．血清（浆）样本等液体样本：直接检测。若有沉淀，离心后测定。

二、试剂准备

1、试剂R3：根据样本量再用试剂R2稀释5倍后备用。用不完的试剂2-8℃可保存1周。

2、标准品：10μmol/mL 亚硝酸钠。

三、测定步骤

1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至530nm，分光光度计蒸馏水调零。

2、标准液的稀释:将标准液用蒸馏水稀释至0.25umol/mL的标准液(可以吸取25uL 10umol/mL亚硝酸钠和975uL蒸馏水混合）。

3、操作表

试剂名称	空白管	测定管	标准管
蒸馏水	10	-	-
上清液	-	10	-
标准液	-	-	10
试剂R1	40	40	40
试剂R3	40	40	40
试剂R4	40	40	40
混匀，37°C水浴/恒温培养箱放置20min
试剂R5	60	60	60
试剂R6	60	60	60
混匀，37°C水浴/恒温培养箱放置20min，于微量玻璃比色皿/96孔板中，测定530nm处吸光值，计算△A标准=A标准管-A空白管，△A样本=A测定管-A空白管。空白管和标准管只需做1-2次。注：△A样本在0.005-1之间数值有效，数值过小或过大，可以增加或者稀释样本量。