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| Cat. Number | HK21305-96S |
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| Chemical Name | HK21305-96S 琥珀酸脱氢酶(SDH)测试盒(酶标板法) |
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| Qty 1 |
100T/96S |
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| References | 琥珀酸脱氢酶SDH（EC 1.3.5.1）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。SDH是线粒体的一种标志酶，位于线粒体内膜上的一种膜结合酶，是连接呼吸电子传递和氧化磷酸化的枢纽之一。此外，为多种原核细胞产能的呼吸链提供电子。 测定原理： SDH催化琥珀酸脱氢生成延胡索酸，脱下的氢通过吩嗪二甲酯硫酸（PMS）传递还原2,6-二氯酚靛酚（DCPIP），并且在600nm处具有特征吸收峰，通过600nm吸光度的变化，测定2,6-DCPIP的还原速度，代表SDH酶活性。 需自备的仪器和用品: 可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。 产品组成：
实验步骤: 注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。 一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献） 1. 组织样本：称取约0.1g 组织，加入 lmL试剂R1和10uL试剂R2，用冰浴匀浆器或研钵匀浆充分研磨，4℃，11000g离心10min，取上清，置冰上待测。 2 细胞或者细菌样本：先收集500万细菌/细胞到离心管内，离心后弃上清；之后加入1mL 试剂R1和 10uL试剂R2，冰浴超声波破碎细菌（功率200W，超声3s，间隔7s，总时间5min)；然后11000g，4℃，离心10 min,取上清置于冰上待测。 二、试剂准备 1、试剂R2：为易挥发试剂，用完后尽快密封，-20℃保存; 三、测定步骤 1、 分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至600nm，分光光度计蒸馏水调零。 2、 样本测定
将试剂R3和试剂R4依次加入到1.5mLEP管中，37℃(哺乳动物)或25℃（其它物种）保温10min后加入到微量比色皿或96孔板再按表格依次加入各试剂，在600nm波长下记录20s时的初始吸光度A1和1min20s时的吸光度A2，计算ΔA=A1-A2，得到ΔA测定、ΔA空白。空白管只需测1-2次。 三、SDH活性的计算 a.用微量比色皿测定的计算公式如下 （1）按样本蛋白浓度计算 单位的定义：每mg组织蛋白在反应体系中每分钟消耗1nmol 2,6-二氯酚靛酚定义为一个酶活性单位。 SDH活性（U/mg prot）=[(ΔA测定-ΔA空白)÷(ε×d)×V反总×109]÷(Cpr×V样) ÷T （2）按样本质量计算 单位的定义：每g组织在反应体系中每分钟消耗1nmol 2,6-二氯酚靛酚定义为一个酶活性单位。 SDH活性（U/g 质量）=[(ΔA测定-ΔA空白)÷(ε×d)×V反总×109]÷(V样÷V样总×W) ÷T （3）按细菌或细胞数量计算 单位的定义：每1万个细菌或细胞在反应体系中每分钟消耗1nmol 2,6-二氯酚靛酚定义为一个酶活性单位。 SDH活性（U/104 cell）=[(ΔA测定-ΔA空白)÷(ε×d)×V反总×109]÷(V样÷V样总×500) ÷T V反总：反应体系总体积； ε：2,6-二氯吲哚酚摩尔消光系数，2.1×104L/mol/cm； d：比色皿光径，1cm； V样：加入样本体积； V样总：加入试剂R1和试剂R2体积； T：反应时间，1min； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL； W：样本质量，g； 500：细菌或细胞总数，500万； 109：单位换算系数，1mol=109nmol。 b.用96孔板测定的计算公式如下 （1）按样本蛋白浓度计算 单位的定义：每mg组织蛋白在反应体系中每分钟消耗1nmol 2,6-二氯酚靛酚定义为一个酶活性单位。 SDH活性（U/mg prot）=[(ΔA测定-ΔA空白)÷(ε×d)×V反总×109]÷(Cpr×V样) ÷T （2）按样本质量计算 单位的定义：每g组织在反应体系中每分钟消耗1nmol 2,6-二氯酚靛酚定义为一个酶活性单位。 SDH活性（U/g 质量）=[(ΔA测定-ΔA空白)÷(ε×d)×V反总×109]÷(V样÷V样总×W) ÷T （3）按细菌或细胞数量计算 单位的定义：每1万个细菌或细胞在反应体系中每分钟消耗1nmol 2,6-二氯酚靛酚定义为一个酶活性单位。 SDH活性（U/104 cell）=[(ΔA测定-ΔA空白)÷(ε×d)×V反总×109]÷(V样÷V样总×500)÷T V反总：反应体系总体积； ε：2,6-二氯吲哚酚摩尔消光系数，2.1×104L/mol/cm； d：96孔板光径，0.6cm； V样：加入样本体积； V样总：加入试剂R1和试剂R2体积； T：反应时间，1min； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL； W：样本质量，g； 500：细菌或细胞总数，500万； 109：单位换算系数，1mol=109nmol。 注意事项： 1、 测定过程中所有试剂和样本在冰上放置，以免变性失活。 2、 若ΔA大于0.5（比色皿）/0.3（96孔板），需将酶液用酶提取液稀释，使ΔA小于0.5/0.3，可提高检测灵敏度。 注意同步修改计算公式。 3、 由于提取液中含有一定浓度的蛋白（约1mg/mL），所以在测定样品蛋白浓度时需要减去提取液本身的蛋白含量。 本试剂盒仅供科研使用! |
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