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Cat. Number

HK21301-48S

Chemical Name

HK21301-48S 海藻糖酶(THL)测试盒(酶标板法)

Qty 1

100T/48S

References

海藻糖酶THL（EC 3.2.1.28）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。海藻糖酶主要功能在于生物体分解海藻糖生成葡萄糖而直接用于能量供应。

测定原理：

采用3,5－二硝基水杨酸法测定THL催化海藻糖产生的还原糖的含量。还原糖与3,5－二硝基水杨酸共热生成棕红色的氨基化合物，540nm处检测，在一定范围内还原糖的量和反应液的颜色深度成正比，由此判断THL活性的高低。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、超声破碎仪、低温离心机、冰和蒸馏水。

产品组成：

实验步骤:

注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献)

1、细菌或细胞的处理：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每500万细菌或细胞加入1mL提取液充分匀浆以破碎并裂解细胞，超声波破碎，(冰浴，功率200W，超声开3秒，关10秒，重复30次);8000g,4C离心10min，取上清，置冰上待测。

2、组织的处理：称取约0.1g组织加入1mL提取液，冰浴中匀浆。8000g，4C下离心10min，取上清，置冰上待测。

3、血清（浆）的处理：吸取约0.1mL血清(浆)，加入0.9mL提取液，冰浴中匀浆。8000g，4C下离心1Omin,取上清，置冰上待测。

二、试剂准备

1.试剂R2：临用前取1支加入0.6mL试剂R1，充分溶解待用，用不完的试剂2-8℃保存1周;

2.标准品：含10mg 无水葡萄糖（干燥失重<0.2%)，临用前加入1mL蒸馏水溶解，配制成10mg/mL标准液待用，4℃可保存2周，或者用饱和苯甲酸溶液溶解，2-8C保存4周；

三、测定步骤

1．分光光度计/酶标仪预热30min 以上，调节波长至540nm，分光光度计用蒸馏水调零；

2．将10mg/mL 标准液用蒸馏水稀释至1、0.8、0.6、0.4、0.2mg/mL，现用现配。

3．样本测定（在1.5mL EP管中依次加入下列试剂）：

试剂名称	对照管	测定管	标准管	空白管
样本	40	40	-	-
标准液	-	-	40	-
蒸馏水	-	-	-	40
试剂R1	70	50	70	70
试剂R2	-	20	-	-
置于37℃（哺乳动物）水浴锅/恒温水浴锅或25℃（其它物种）水浴锅中，准确反应时间10min
试剂R3	95	95	95	95
试剂R4	95	95	95	95
涡旋混匀，100C煮沸5min(盖紧，以防止水分散失)，冷却至室温后，取200uL至微量玻璃比色皿或96孔板中测定540nm\|处测吸光值，分别记为A对照、A测定、A标准、A空白。计算AA测定=A测定-A对照，AA标准=A标准-A空白。每个测定管均需设立一个对照管。标准曲线和空白管只需测1-2次。