HK21299-96S 海藻糖含量测试盒(酶标板法)_上海惠诚生物生物试剂,标准品,仪器设备,耗材,一站式服务

测定方法采用蒽酮比色法。强酸可使糖类脱水生成糠醛，生成的糠醛或羟甲基糖醛与蒽酮脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色，该物质在 620nm 处有最大吸收。该方法具有灵敏度高﹑简便快捷﹑适用于微量样本的测定等优点。但是蒽酮比色法也存在一定缺陷，如果样本中含有可溶性糖，则会影响测定。本试剂盒建议用于除海藻糖外不含其他可溶性糖样本的测定。

需要的仪器，耗材:

1、可见分光光度计/酶标仪

2、台式离心机

3、可调式移液器

4、微量石英比色皿/96孔板

5、研钵、冰和蒸馏水。

产品组成：

试剂名称	规格	保存条件
提取液	液体×1瓶	2-8℃
试剂R1	粉剂×1瓶	2-8℃
标准品	粉剂×1支	2-8℃

实验步骤：

一、样本处理(具体比例可以参考文献)

1.细菌或细胞处理：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每500万细菌或细胞加入1ml提取液，超声波破碎细菌或细胞(功率20%或200w，超声3秒，间隔10秒，重复30次)，室温静置45min，振荡3～5次，冷却后，8000g，常温离心10min，取上清。

2.组织的处理：称取约0.1g样本，加入1ml提取液，冰浴匀浆或研碎，室温静置45min，振荡3～5次，冷却后，8000g，常温离心10min，取上清。

3.血清(浆)的处理：吸取约100μL血清(浆)，加入0.9ml提取液，充分混匀，室温静置45min，振荡3～5次，冷却后，8000g，常温离心，取上清。

二、试剂准备：

1.标准品：10mg海藻糖，临用前加1ml蒸馏水，溶液浓度为10mg/ml；

2.工作液的配制：

临用前在试剂R1中加入7ml蒸馏水后，缓慢加入28ml浓硫酸，不断搅拌，充分溶解，待用。用不完的试剂4℃保存一周。

三、测定操作

1.分光光度计或酶标仪预热30min，波长调节至620nm，蒸馏水调零。

2.调节水浴锅至95℃。

3.标准品的准备

将标准品用蒸馏水按梯度进行稀释，最大浓度为1mg/ml。

标准液稀释可参考下表：

序号	稀释前浓度（mg/mL）	标准液体积（µL）	蒸馏水体积（µL）	稀释后浓度（mg/mL）
1	10	100	900	1
2	1	200	800	0.2
3	0.2	500	500	0.1
4	0.1	150	50	0.075
5	0.1	100	100	0.05
6	0.1	50	150	0.025
7	0.1	25	175	0.0125
8	0.1	0	200	0