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Cat. Number

HK21297-96S

Chemical Name

HK21297-96S 还原型谷胱甘肽(GSH)测试盒(酶标板法)

Qty 1

100T/96S

References

谷胱甘肽是由谷氨酸(Glu)、半胱氨酸(Cys）和甘氨酸（Gly)组成的天然三肽，是一种含疏基（-SH）的化合物，广泛存在于动物组织、植物组织、微生物和酵母中。

测定原理：

谷胱甘肽能和5,5`-二硫代-双-(2-硝基苯甲酸)(5,53 -dithiobis-2-nitrobenoic acid，DTNB）反应产生2-硝基-5-疏基苯甲酸和谷胱甘肽二硫化物(GSSG)。2-硝基-5-疏基苯甲酸为黄色产物，在波长412nm处具有最大光吸收。

需自备的仪器和用品:

分析天平、匀浆器/研钵!细胞超声破碎仪、低温离心机、水浴锅、移液器、可见分光光度计或酶标仪、微量玻璃比色皿或96孔板。

产品组成：

试剂名称	规格	保存条件
试剂R1	液体×1 瓶	2-8℃
试剂R2	液体×1 瓶	2-8℃
试剂R3	液体×1 瓶	2-8℃
标准品	粉剂×1 支	2-8℃

实验步骤:

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1、组织处理:

新鲜组织首先用PBS 冲洗2次，然后称取动物组织或者植物组织0.1g，加入用试剂R1润洗过的匀浆器中(匀浆器提前放冰上预冷)；然后加入1mL试剂R1(组织/试剂R1比例保持不变即可)，迅速冰上充分研磨（使用液氮研磨效果更好)；8000rpm，4C离心10min；取上清液放置于4℃待测，若暂时不能完成测试可放于-80°C保存(可保存3天)。

2、血液处理

血浆：将收集的抗凝血于4℃，600g离心10分钟，吸取上层血浆到另一支试管中，加入等体积的试剂R1，4°℃C，8000g离心10分钟，将上清移入新的试管中放置于4C待测,若暂时不能完成测试可放于-80C保存(可保存3天)。

血细胞：将收集的抗凝血于4℃，600g离心10分钟，弃去上层血浆用3倍体积的 PBS清洗3次（用PBS重悬血细胞，600g 离心10分钟)，加入等体积试剂R1，混匀后4℃放置10分钟，8000g离心10分钟，吸取上清放于4C待测，若暂时不能完成测试可放于-80℃保存（可保存3天)。

3、细胞处理

收集不少于500万个细胞，首先用PBS清洗细胞2次（PBS重悬细胞，600g离心10分钟)，加入1mL试剂一重悬细胞，反复冻融2-3次（可在液氮中冻结，37C水浴中溶解）或者进行超声〈200W，超3s，停10s，重复30次)，8000g离心10分钟，收集上清于4℃待测，若暂时不能完成测试可放于-80℃保存(可保存10天)。

二、试剂准备

标准品：10mg还原型谷胱甘肽(GSH)。临用前加入1mL蒸馏水溶解，浓度为10mg/mL。2-8°C可以保存6周。

三、测定步骤

1、分光光度计或酶标仪预热30min 以上，调节波长至412nm，分光光度计蒸馏水调零。

2、标准品的准备：吸取10mg/mL标准溶液，用蒸馏水稀释至300ug/mL、200ug/mL、100ug/mL、50ug/mL、25ug/mL。备注：实验中每个标准管需20uL标准液。

3、加样表：在1.5mLEP管/96孔板中分别加入下列试剂

试剂名称	测定管	标准管	空白管
样本	20	-	-
标准溶液	-	20	-
蒸馏水	-	-	20
试剂R2	140	140	140
试剂R3	40	40	40
混匀后常温静置2min后分别测定测定管、标准管和空白管在412nm处的吸光度，分别记为A测定、A标准和A空白，计算AA=A测定-A空白，AA标准=A标准-A空白。标准曲线和空白管只需做1-2次。