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| Cat. Number | HK21291-96S |
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| Chemical Name | HK21291-96S 过氧化氢酶(CAT)测试盒(酶标板法) |
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| Qty 1 |
100T/96S |
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| References | 过氧化氢酶CAT(EC 1.11.1.6)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是最主要的H2O2清除酶，在活性氧清除系统中具有重要作用。 测定原理： H2O2在240nm下有特征吸收峰，CAT能够分解H2O2，使反应溶液240nm下的吸光度随反应时间而下降，根据吸光度的变化率可计算出CAT活性。 需自备的仪器和用品： 紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔UV 板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。 产品组成：
操作步骤： 注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。 一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献） 1、细菌、细胞或组织样本的制备： a、细菌或培养细胞：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每500 万细菌或细胞加入1mL 提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率200W，超声3s，间隔10s，重复30 次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。 b、组织：按照组织质量（g）：称取约0.1g 组织，加入1mL 提取液进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。 2、血清（浆）样本：直接检测。 二、试剂准备 1、试剂R2：液体置于试剂瓶内EP 管中，使用前需先离心。 2、检测工作液的配制：取试剂R2 25 μL 中加入5mL 试剂R1，充分混匀，作为工作液（约26T），现用现配；也可根据样本量按比例配制（提供1 个15 mL 空瓶）。 三、测定步骤 1、分光光度计或酶标仪预热30min 以上，调节波长至240nm，蒸馏水调零。 2、测定前将CAT 检测工作液在37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴10min 以上。 3、在微量石英比色皿或96 孔板中加入10μL 样本和190μL 工作液，立即混匀并计时，记录240nm 下初始吸光值A1 和1min 后的吸光值A2。计算ΔA=A1-A2。 三、CAT 活性计算 a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下 1、血清（浆）CAT 活力的计算： 单位的定义：每mL 血清（浆）每分钟催化1μmol H2O2 降解定义为一个酶活力单位。 CAT(U/mL)= [ΔA×V 反总÷（ε×d）×106]÷V 样÷T 2、组织、细菌或细胞中CAT 活力计算： （1）按样本蛋白浓度计算： 单位的定义：每mg 组织蛋白每分钟催化1μmol H2O2 降解定义为一个酶活力单位。 CAT(U/mg prot)=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×106]÷(Cpr×V 样) ÷T （2）按样本质量计算： 单位的定义：每g 组织每分钟催化1μmol H2O2 降解定义为一个酶活力单位。 CAT(U/g 质量)=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×106]÷（V 样÷V 样总×W）÷T （3） 按细菌或细胞数量计算： 单位的定义：每1 万个细菌或细胞每分钟催化1μmol H2O2 降解定义为一个酶活力单位。 CAT(U/104 cell)=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×106]÷（V 样÷V 样总×500）÷T V 反总：反应体系总体积，2×10-4L； ε：H2O2 摩尔消光系数，43.6 L/mol/cm； d：比色皿光径，1cm； V 样：加入样本体积； V 样总：加入提取液体积； T：反应时间，1min； W：样本质量，g； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL； 500：细胞或细菌总数，500 万； 106：单位换算系数，1mol=106μmol。 b.用96 孔板测定的计算公式如下 1、血清（浆）CAT 活力的计算： 单位的定义：每mL 血清（浆）在反应体系中每分钟催化1μmol H2O2 降解定义为一个酶活力单位。 CAT(U/mL)=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×106]÷V 样÷T 2、组织、细菌或细胞中CAT 活力计算： （1）按样本蛋白浓度计算： 单位的定义：每mg 组织蛋白在反应体系中每分钟催化1μmol H2O2 降解定义为一个酶活力单位。 CAT(U/mg prot)=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×106]÷(Cpr×V 样) ÷T （2）按样本质量计算： 单位的定义：每g 组织在反应体系中每分钟催化1μmol H2O2 降解定义为一个酶活力单位。 CAT(U/g 质量)=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×106]÷（V 样÷V 样总×W）÷T （3） 按细菌或细胞数量计算： 单位的定义：每1 万个细菌或细胞在反应体系中每分钟催化1μmol H2O2 降解定义为一个酶活力单位。 CAT(U/104 cell)=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×106]÷（V 样÷V 样总×500）÷T V 反总：反应体系总体积，2×10-4L； ε：H2O2 摩尔消光系数，43.6 L/mol/cm； d：96 孔板光径，0.6cm； V 样：加入样本体积； V 样总：加入提取液体积； T：反应时间，1min； W：样本质量，g； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL； 500：细胞或细菌总数，500 万； 106：单位换算系数，1mol=106μmol。 注意事项： 如果反应液有大量气泡产生，将样本用蒸馏水稀释后再进行测定。 本试剂盒仅供科研使用! |
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