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| Cat. Number | HK21289-96S |
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| Chemical Name | HK21289-96S 过氧化氢(H2O2)试剂盒(酶标板法) |
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| Qty 1 |
100T/96S |
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| References | H2O2是生物体内最常见的活性氧分子，主要由SOD和XOD等催化产生，由CAT和POD等催化降解。H2O2不仅是重要的活性氧之一，也是活性氧相互转化的枢纽。一方面，H2O2可以直接或间接地氧化细胞内核酸，蛋白质等生物大分子，并使细胞膜遭受损害，从而加速细胞的衰老和解体；另一方面H2O2也是许多氧化应激反应中的关键调节因子。 测定原理： H2O2与硫酸钛生成黄色的过氧化钛复合物，在415nm有特征吸收。 需自备的仪器和用品： 可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、丙酮、浓盐酸、研钵/匀浆器和冰。 产品组成：
实验步骤： 注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。 一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献） 细菌或细胞样本的制备：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每500 万细菌或细胞加入1mL 试剂R1，超声波破碎细菌或细胞（功率20%，超声3s，间隔10s，重复30 次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。 组织样本的制备：称取约0.1g 组织，加入1mL 试剂R1进行冰浴匀浆；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。 血清（浆）样本：按照每100μL 血清（浆）加入0.9mL 试剂R1的比例充分混匀；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。 二、试剂准备 1、试剂R1：丙酮自备。 2、试剂R2：临用前加入3 mL 浓盐酸充分溶解备用，用不完的试剂4℃保存。 3、标准品：1 mmol/mL H2O2 标准液。 三、测定步骤 1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至415nm，蒸馏水调零。 2、将试剂R2、R3和R4 37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴10min以上。 3、如果用96孔板将则用丙酮将1mmol/mL标准液稀释为2μmol/mL的标准溶液，用微量玻璃比色皿则用丙酮将1mmol/mL标准液稀释为1μmol/mL的标准溶液。 4、在EP管中按顺序加入下列试剂
加入试剂四溶解沉淀后，室温静置5min，取200μL 转移至微量玻璃比色皿或96 孔板中测定415nm 处吸光值（空白管只要做1-2 次即可）。计算ΔA 测定=A 测定管-A 空白管，ΔA 标准=A 标准管-A 空白管。 三、H2O2含量计算 A、按96孔板计算 1、按照细菌、细胞数量计算： H2O2含量（μmol/104 cell）=ΔA测定÷(ΔA标准÷C标液)×V样本÷(500×V样本÷V提取) 2、按组织质量计算： H2O2含量（μmol/g 质量）=ΔA测定÷（ΔA标准÷C标液）×V样本÷(V样本÷V提取×W) 3、按照蛋白浓度计算： H2O2含量（μmol/mg prot）=ΔA测定÷（ΔA标准÷C标液）×V样本÷（Cpr×V样本） 4、按血清（浆）体积计算： H2O2含量(μmol/mL)=ΔA测定÷（ΔA标准÷C标液）×10 500：细胞或细菌总数，万个； C标液：H2O2标准溶液浓度； V样本：加入的样本体积； W：组织质量，g； V提取：提取过程中所用体积； Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL； 10：血清稀释倍数，[0.1mL血清（浆）+0.9mL试剂一] ÷0.1mL血清（浆）=10。 B、按微量玻璃比色皿计算 将公式中的C标液-2μmol/mL改为C标液-1μmol/mL进行计算即可。 本试剂盒仅供科研使用! |
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