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Cat. Number

HK21285-96S

Chemical Name

HK21285-96S 果糖-1,6-二磷酸酶(FBP)测试盒(酶标板法)

Qty 1

100T/96S

References

果糖-1,6-二磷酸酶（Fructose 1,6-bisphosphatase，FBP）又称果糖-1,6-二磷酸酯酶，其在糖异生过程和光合作用同化物蔗糖的合成中起关键性的作用。催化1,6-二磷酸果糖和水生成6-磷酸果糖和无机磷。

测定原理：

FBP催化1,6-二磷酸果糖和水，生成6-磷酸果糖和无机磷，在反应体系中添加的磷酸葡萄糖异构酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化生成6-磷酸葡萄糖酸和NADPH，测定340nm下NADPH的增加速率，即可计算FBP活性。

需自备的仪器和用品：

紫外分光光度计/酶标仪、天平、低温离心机、微量石英比色皿/96孔UV板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰盒、蒸馏水。

产品组成：

试剂名称	规格	保存条件
提取液	液体×1 瓶	2-8℃
试剂R1	粉剂×1 瓶	2-8℃
试剂R2	液体×1 瓶	-20℃
试剂R3	液体×1 瓶	-20℃
试剂R4	液体×1 瓶	2-8℃

实验步骤：

注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

组织：按照质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取约0.1g，加入1mL 提取液）进行冰浴匀浆。于4℃，8000g，离心10min，取上清，置冰上待测。

细胞：按照细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为500~1000：1 的比例（建议500 万细胞加入1mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3 秒，间隔7 秒，总时间3min），于4℃，8000g，离心10min，取上清，置冰上待测。

二、试剂准备

1. 试剂R1：临用前加入20 mL 试剂四充分溶解待用，用不完的试剂于4℃保存。

2. 试剂R2：液体置于试剂瓶内EP 管中。临用前加入1.1 mL 蒸馏水充分溶解待用，用不完的试剂分装后-20℃保存，避免反复冻融。

3. 试剂R3：液体置于试剂瓶内EP 管中。临用前加入1.1 mL 蒸馏水充分溶解待用，用不完的试剂分装后-20℃保存，避免反复冻融。

三、测定步骤

1、分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。

2、将试剂R1 37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)预热10min。

3、操作表：(在微量石英比色皿/96孔UV板中依次加入下列试剂)

试剂名称（uL）	测定管	空白管
样本	20	-
提取液	-	20
试剂R2	10	10
试剂R3	10	10
试剂R1	160	160

在微量石英比色皿/96 孔UV 板中分别加入上述试剂，充分混匀后于340nm 处测定10s 时的吸光值A1，迅速置于37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)水浴或培养箱5min（酶标仪有控温功能可直接调节温度），拿出迅速擦干测定310s 时的吸光值A2，计算ΔA 测定管=A2 测定-A1 测定，ΔA 空白管=A2 空白-A1 空白，ΔA=ΔA 测定管-ΔA空白管。（空白管只需做1-2 次）

四、FBP 酶活性计算

A 按微量石英比色皿计算

1. 按蛋白浓度计算

单位的定义：每mg组织蛋白每分钟生成1nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。

FBP（U/mg prot）=ΔA÷（ε×d）×109×V反总÷(Cpr×V样) ÷T

2. 按样本质量计算

单位的定义：每g组织每分钟生成1nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。

FBP（U/g 质量）=ΔA÷（ε×d）×109×V反总÷(W ×V样÷V样总) ÷T

3. 按细菌或细胞密度计算

单位的定义：每104个细菌或细胞每分钟生成1nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。

FBP（U/104 cell）=ΔA÷（ε×d）×109×V反总÷(V样÷V样总×细胞数量（万个）) ÷T

V反总：反应体系总体积；