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| Cat. Number | HK21278-96S |
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| Chemical Name | HK21278-96S 果胶裂解酶测试盒(酶标板法) |
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| Qty 1 |
100T/96S |
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| References | 果胶裂解酶（EC.4.2.2.10）是果胶酶的重要组成部分，催化果胶分子链的消除裂解。来源比较广泛，主要来源于微生物，在食品加工工业中提高果汁产量方面有重要意义，在减少环境污染和降低能源消耗方面也具有潜在的应用价值。 检测原理： 果胶裂解酶作用于果胶中的α-1,4 糖苷键，生成在还原端C4和C5之间位置具有不饱和键的不饱和寡聚半乳糖醛酸，在235nm处有特征吸收峰，测定235nm下吸光度的上升来表示果胶裂解酶的活性。 需自备的仪器和用品： 紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、恒温水浴锅、微量石英比色皿/96孔UV板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。 产品组成：
实验步骤： 注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。 一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献） 1．组织：按照组织质量（g）：提取液体积（mL）为1：5~10 的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL 提取液），进行冰浴匀浆。10000g ，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。 2．细菌、真菌：按照细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为500~1000：1 的比例（建议500 万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3 秒，间隔7 秒，总时间3min）；然后10000g，4℃离心10min，取上清置于冰上待测。 3. 培养液：直接测定。 二、试剂准备 试剂R1：溶液中如果有沉淀存在，可以50℃水浴助溶。 三、测定步骤 1、分光光度计/酶标仪预热30min 以上，调节波长至235nm，蒸馏水调零。 2、操作表：
四、果胶裂解酶活性计算 A、按微量石英比色皿计算： 1. 按照蛋白浓度计算 酶活性定义：在40℃，pH5.5 条件下，每毫克蛋白每分钟分解果胶产生1nmol 不饱和半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位。 PL 活性（U/mg prot）=ΔA÷（ε×d）×V 反总×109÷（V 样×Cpr）÷T 2. 按照样本质量计算 酶活性定义：在40℃，pH5.5 条件下，每克组织每分钟分解果胶产生1nmol 不饱和半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位。 PL 活性（U/g 质量）=ΔA÷（ε×d）×V 反总×109÷（V 样×W÷V 样总）÷T 3. 按照细菌、真菌数量计算 酶活性定义：在40℃，pH5.5 条件下，每104 个细胞每分钟分解果胶产生1nmol 不饱和半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位。 PL 活性（U/104 cell）= ΔA÷（ε×d）×V 反总×109÷（V 样×细胞数量÷V 样总）÷T 4. 按照培养液体积计算 酶活性定义：在40℃，pH5.5 条件下，每毫升培养液每分钟分解果胶产生1nmol 不饱和半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位。 PL 活性（U/mL）=ΔA÷（ε×d）×V 反总×109÷V 样÷T ε：不饱和半乳糖醛酸摩尔消光系数：5200 L/mol/cm； d：比色皿光径，1cm； V 反总：反应总体积； V 样：反应体系中样本体积； V 样总：加入提取液体积； Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL； W，样本质量，g； T：反应时间，30min； 109：换算系数，1mol=109nmol。 B、按96 孔UV 板计算： 将上述公式中的d-1cm 修改为d-0.6cm（96 孔板光径）进行计算即可。 注意事项： 1、若ΔA 大于0.5，将粗酶液用蒸馏水稀释后再进行测定。若A 测定管大于1.5 时，建议将样本用蒸馏水稀释后再进行测定。 2、建议一次测定不要测定过多样本以免耽误过多的酶促反应时间。 3、空白管正常情况下变化不超过0.02。 本试剂盒仅供科研使用! |
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