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| Cat. Number | HK21273-48S |
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| Chemical Name | HK21273-48S 谷胱甘肽还原酶(GR)测试盒(紫外分光光度法) |
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| Qty 1 |
50T/48S |
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| References | GR 是广泛存在于真核和原核生物中的一种黄素蛋白氧化还原酶，是谷胱甘肽氧化还原循环的关键酶之一（通常昆虫中 GR 被 TrxR 取代）。GR 催化 NADPH 还原 GSSG 生成 GSH，有助于维持体内 GSH/GSSG 比值。GR 在氧化胁迫反应中对活性氧清除起关键作用，此外GR还参与抗坏血酸－谷胱甘肽循环途径。 检测原理： GR 能催化 NADPH 还原 GSSG 再生 GSH，同时 NADPH 脱氢生成 NADP+；NADPH 在 340 nm 有特征吸收峰，相反 NADP+在该波长无吸收峰；通过测定 340 nm 吸光度下降速率来测定 NADPH 脱氢速率，从而计算 GR 活性。 需自备的仪器和用品： 低温离心机、水浴锅、移液器、匀浆器/研钵、紫外分光光度计、1mL石英比色皿和蒸馏水。 产品组成：
实验步骤： 注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。 一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献） 称约0.1g 组织，加入1.0 mL 试剂R1，冰上充分研磨，10000rpm 4℃离心10min，取上清液，待测。 二、试剂准备 1、试剂R3：临用前加入2.0 mL 蒸馏水，混匀。 三、测定步骤 1. 分光光度计预热30 min 以上，调节波长到340nm，蒸馏水调零。 2. 试剂R1置于25℃（普通物质）或者37℃（哺乳动物）中预热30min 以上。 3. 操作表：在1mL石英比色皿中依次加入
注：样本测定10s 时吸光度后，将比色皿放入25℃（普通物质）或者37℃（哺乳动物）水浴，3min 后拿出，吸打混匀，立即测定190s 时的吸光度。 四、GR 活性计算 （1）按样本蛋白浓度计算 活性单位定义：在一定温度中，pH8.0 条件下，每毫克蛋白每分钟催化1μmol NADPH 氧化为一个酶活力单位。 GR 酶活(U/mg prot)= [ (ΔA 测定管-ΔA 空白管)÷(ε×d)×V 反总×106] ÷（Cpr×V 样）÷T （2）按样本质量计算 活性单位定义：在一定温度中，pH8.0 条件下，每克样本每分钟催化1μmol NADPH 氧化为一个酶活力单位。 GR 酶活(U/g 质量)= [ (ΔA 测定管-ΔA 空白管)÷(ε×d)×V 反总×106] ÷(V 样÷V 样总×W)÷T ΔA 空白管=A 空1-A 空2 ΔA 测定管=A 测1-A 测2； ε：NADPH 摩尔消光系数6.22×103L/mol/cm； d：比色皿光径，1cm； V 反总：反应体系总体积； 106：单位换算系数，1mol=1×106μmol； Cpr：上清液蛋白浓度，mg/mL； W：样本质量，g； V 样：加入反应体系中上清液体积； V 样总：样本总体积； T：反应时间，3min。 注意事项： 1、样本处理等过程均需要在冰上进行，且须在当日测定酶活力，匀浆液避免反复冻融； 2、试剂R3须现配现用，配置完后，置于冰上； 3、测定前须先用1-2 个样做预实验，哺乳动物组织一般须用试剂R1稀释2-5 倍； 4、由于试剂R1中含有一定浓度的蛋白（约0.1mg/mL），所以在测定样本蛋白浓度时需要减去试剂一本身的蛋白含量。 本试剂盒仅供科研使用! |
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