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| Cat. Number | HK21269-96S |
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| Chemical Name | HK21269-96S 谷胱甘肽S-转移酶(GST)测试盒(酶标板法) |
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| Qty 1 |
100T/96S |
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| References | 谷胱甘肽S-转移酶GST是一种具有多种生理功能的蛋白质家族，主要存在于细胞质内。GST是体内解毒酶系统的重要组成部分，主要催化各种化学物质及其代谢产物与GSH的巯基共价结合，使亲电化合物变为亲水物质，易于从胆汁或尿液中排泄，达到将体内各种潜在或具备毒性的物质降解并排出体外的目的。因此，GST在保护细胞免受亲电子化合物的损伤中发挥着重要的生物学功能。此外，因为GST具有GSH-Px活性，亦称为non-Se GSH-Px，具有修复氧化破坏的大分子如DNA、蛋白质等的功能。注意，GST催化的反应减少GSH含量，但是不增加GSSG含量。 测定原理： GST催化GSH与CDNB结合，其结合产物的光吸收峰波长为340nm；通过测定340nm波长处吸光度上升速率，即可计算出GST活性。 自备仪器和用品： 低温离心机、水浴锅、可调节移液器、紫外-可见分光光度计/酶标仪、研钵/匀浆器、微量石英比色皿/96 孔UV板和蒸馏水。 产品组成：
实验步骤： 注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。 一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献） 1. 组织：按照组织质量（g）：试剂R1体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL 试剂R1）进行冰浴匀浆。8000g，4℃离心10min，取上清置冰上待测。 2. 细菌、真菌：按照细胞数量（104 个）：试剂R1体积（mL）为500~1000：1 的比例（建议500 万细胞加入1mL试剂R1），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3 秒，间隔7 秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。 3 . 血清等液体：直接测定。 二、试剂准备 试剂R3：临用前加2mL 蒸馏水溶解。 三、测定步骤 1. 分光光度计/酶标仪预热30 min 以上，调节波长到340nm，用蒸馏水调零。 2. 试剂R2放在25℃（一般物种）或者37℃（哺乳动物）保温。 3. 测定表：
四、GST 活性计算 a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下 1、按蛋白浓度计算 活性单位定义：在25℃或者37℃中，每毫克蛋白每分钟催化1μmol CDNB 与GSH 结合为一个酶活性单位。 GST（U/mg prot）=[(A4-A3)-(A2-A1)]÷(ε×d)×106×V 反总÷(Cpr×V 样)÷T 2、按样本质量计算 活性单位定义：在25℃或者37℃中，每克样本每分钟催化1μmol CDNB 与GSH 结合为一个酶活性单位。 GST（U/g 质量）=[(A4-A3)-(A2-A1)]÷(ε×d)×106×V 反总÷(V 样÷V 样总×W)÷T 3、按细胞数量计算 活性单位定义：在25℃或者37℃中，每104 个细胞每分钟催化1μmol CDNB 与GSH 结合为一个酶活单位。 GST（ U/104 cell） =[(A4-A3)-(A2-A1)]÷(ε×d)×106×V 反总÷(500×V 样÷V 样总)÷T 4、按液体体积计算 活性单位定义：在25℃或者37℃中，每毫升液体每分钟催化1μmol CDNB 与GSH 结合为一个酶活单位。 GST（U/mL）= [(A4-A3)-(A2-A1)]÷(ε×d)×106×V 反总÷V 样÷T ε：产物摩尔消光系数，9.6×103L/mol/cm； d：比色皿光径，1cm； 106：单位换算系数，1mol=1×106μmol； V反总：反应体系总体积； Cpr：上清液蛋白质浓度（mg/mL），需要另外测定； W ：样本质量，g； V样：加入反应体系中上清液体积； V 样总：试剂一体积； T：反应时间，5min； 500：细胞数量，500 万。 b.使用96 孔板测定的计算公式如下 1、按蛋白浓度计算 活性单位定义：在25℃或者37℃中，每毫克蛋白每分钟催化1μmol CDNB 与GSH 结合为一个酶活性单位。 GST（U/mg prot）=[(A4-A3)-(A2-A1)]÷(ε×d)×106×V 反总÷(Cpr×V 样)÷T 2、按样本质量计算 活性单位定义：在25℃或者37℃中，每克样本每分钟催化1μmol CDNB 与GSH 结合为一个酶活性单位。 GST（U/g 质量）=[(A4-A3)-(A2-A1)]÷(ε×d)×106×V 反总÷(V 样÷V 样总×W)÷T 3、按细胞数量计算 活性单位定义：在25℃或者37℃中，每104 个细胞每分钟催化1μmol CDNB 与GSH 结合为一个酶活单位。 GST（U/104 cell）=[(A4-A3)-(A2-A1)]÷(ε×d)×106×V 反总÷(500×V 样÷V 样总)÷T 4、按液体体积计算 活性单位定义：在25℃或者37℃中，每毫升液体每分钟催化1μmol CDNB 与GSH 结合为一个酶活单位。 GST（U/mL）=[(A4-A3)-(A2-A1)]÷(ε×d)×106×V 反总÷V 样÷T ε：产物摩尔消光系数，9.6×103L/mol/cm； d：96 孔板光径，0.6cm； 106：单位换算系数，1mol=1×106μmol； V反总：反应体系总体积； Cpr：上清液蛋白质浓度（mg/mL），需要另外测定； W ：样本质量，g； V样：加入反应体系中上清液体积； V样总：加入试剂一体积； T：反应时间，5min； 500：细胞数量，500 万。 注意事项： 1. 样本处理等过程均需要在冰上进行，且须在当日测定酶活力； 2. 细胞中GST 活性测定时，细胞数目须在300 万-500 万之间，细胞中GST 的提取时可加试剂R1后研磨或超声波处理，不能用细胞裂解液处理细胞； 3. 若样本测定吸光度大于1，建议对样本用蒸馏水稀释，计算时结果乘以稀释倍数； 4. 测定反映的温度对测定结果有影响，请控制在25℃或者37℃（哺乳动物）。 本试剂盒仅供科研使用! |
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