服务热线
021-60498804
| Cat. Number | HK21267-48S |
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Chemical Name | HK21267-48S 谷草转氨酶(GOT)测试盒(酶标板法) |
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Qty 1 |
100T/48S |
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| References | 谷草转氨酶又叫天门冬氨酸氨基转移酶（ 2.6.1.1），广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化可逆转氨基反应，是氨基酸代谢的重要酶。此外，GOT在心肌细胞中含量最高，临床上一般常作为心肌梗塞和心肌炎的辅助检查。肝脏损害时其血清浓度也可升高。 测定原理： GOT催化α-酮戊二酸和天门冬氨酸发生转氨基反应，生成谷氨酸和草酰乙酸，草酰乙酸进一步自行脱羧生成丙酮酸；丙酮酸可与2,4-二硝基苯肼反应生成2,4-二硝基苯腙，在碱性条件下显棕红色；测定505nm吸光度的变化，即可计算GOT酶活力。 需自备的仪器和用品： 可见分光光计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。 产品组成：
实验步骤： 注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。 一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献） 1、细胞或细菌样本的制备：先收集细胞或细菌样本到离心管内，弃上清，按照每500 万细胞或细菌加入1mL提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率20%，超声3s，间隔10s，重复30 次）。3500g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。 2、组织：称取约0.1g 组织，加入1mL 提取液进行冰浴匀浆。3500g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。 3、血清（浆）样本：直接检测。 二、试剂准备 1、试剂R1：提供1 个8 mL 空瓶；临用前取1 支试剂R1倒入空瓶中，用2 mL 蒸馏水溶解，再用溶液将试剂R1残留的试剂润洗下来，现用现配； 2、标准品：20 μmol/mL 丙酮酸钠。 三、测定步骤 1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至505nm，蒸馏水调零。 2、标准曲线的测定：首先将标准品用蒸馏水稀释至2μmol/mL，稀释成1.5、1、0.8、0.4、0.2、0.1、0.05、0μmol/mL。 3、在EP 管或在96 孔板中加入下列试剂
混匀，室温放置10min，在505nm波长处测各管吸光度。 注：0μmol/mL 标准管为空白管。 四、GOT 活性计算 1、标准曲线的绘制： 以各标准溶液浓度为x轴，以ΔA（A标准管-A空白管）为y轴做标准曲线，得到方程y=kx+b。将（A测定管-A 对照管）带入方程求x值。 2、GOT活性计算： （1）按样本质量计算： 单位定义：每小时每g样本催化产生1μmol丙酮酸的量为一个GOT活力单位。 GOT（U/g 质量）=x×（V样本+V试剂R1）÷（W×V样本÷V样总）÷T （2）按样本蛋白浓度计算： 单位定义：每小时每mg组织蛋白催化产生1μmol丙酮酸的量为一个GOT活力单位。 GOT（U/mg prot）=x×（V样本+V试剂R1）÷（Cpr×V样本）÷T （3）按血清（浆）体积计算： 单位定义：每小时每mL血清样本催化产生1μmol丙酮酸的量为一个GOT活力单位。 GOT（U/mL）=x×（V样本+V试剂R1）÷V样本÷T （4）按细菌或细胞数量计算： 单位定义：每小时每104细菌或细胞催化产生1μmol丙酮酸的量为一个GOT活力单位。 GOT（U/104cell）=x×（V样本+V试剂R1）÷（500÷V样总×V样本）÷T V样本：吸取样本体积； V试剂R1：吸取试剂R1体积； V样总：吸取提取液体积； W：样本质量，g； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL； T：反应时间，0.5h； 500：细胞数量，500万个。 本试剂盒仅供科研使用! |
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Copyright © 2022 上海惠诚生物科技有限公司
沪ICP备2021037845号-6
