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| Cat. Number | HK21265-48S |
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| Chemical Name | HK21265-48S 谷丙转氨酶(GPT)测试盒(酶标板法) |
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| Qty 1 |
100T/48S |
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| References | 谷丙转氨酶又叫丙氨酸氨基转移酶（EC 2.6.1.2），GPT（EC 2.6.1.2）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化氨基酸和酮酸转氨基反应，在氨基酸代谢中具有重要作用。此外，哺乳动物肝细胞GPT活性很高，当肝细胞坏死，GPT释放到血液中，血清GPT活性显著增高。因此，GPT被世界卫生组织推荐为肝功能损害最敏感的检测指标。 测定原理： GPT催化丙氨酸和α-酮戊二酸发生转氨基反应，生成丙酮酸和谷氨酸；加入2,4-二硝基苯肼溶液，不仅终止上述反应，而且与酮酸中的羰基加成，生成丙酮酸苯腙；苯腙在碱性条件下呈红棕色，可以在505nm读取吸光值并计算酶活力。 需自备的仪器和用品： 可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。 产品组成：
实验步骤： 注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。 一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献） 1、细胞或细菌的制备：先收集细胞或细菌样本到离心管内，弃上清，按照每500 万细胞或细菌加入1mL 提取液，超声波破碎细胞或细菌（功率20%，超声3s，间隔10s，重复30 次）。3500g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。 2、组织：称取约0.1g 组织，加入1mL 提取液进行冰浴匀浆。3500g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。 3、血清（浆）样本：直接检测。 二、试剂准备 1、试剂R1：提供1 个8 mL 棕瓶；临用前取1 支试剂R1倒入空瓶中，用2mL 蒸馏水溶解，再用溶液将试剂R1残留试剂润洗下来； 2、标准液：20 μmol/mL 丙酮酸钠。 三、测定步骤 1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至505nm，蒸馏水调零。 2、标准曲线的稀释：首先将标准品用蒸馏水稀释至2μmol/mL，稀释成1.5、1、0.8、0.4、0.2、0.1、0.05、0μmol/mL。 3、在EP管或在96孔板中加入下列试剂
混匀后，37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）反应30min
混匀后，37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）准确反应20min
注：0μmol/mL 标准管为空白管。 四、GPT 活性计算 1. 标准曲线的绘制： 以各标准溶液浓度为x轴，以ΔA（A标准管-A空白管）为y轴做标准曲线，得到方程y=kx+b。将（A测定管-A对照管）带入方程求x值。 2. GPT活性计算： （1）按样本质量计算： 单位定义：每小时每g样本催化产生1μmol丙酮酸的量为一个GPT活力单位。 GPT（U/g 质量）=x×（V样本+V试剂R1）÷（W×V样本÷V样总）÷T （2）按样本蛋白浓度计算： 单位定义：每小时每mg组织蛋白催化产生1μmol丙酮酸的量为一个GPT活力单位。 GPT（U/mg prot）=x×（V样本+V试剂R1）÷（Cpr×V样本）÷T （3）按血清（浆）体积计算： 单位定义：每小时每mL血清（浆）样本催化产生1μmol丙酮酸的量为一个GPT活力单位。 GPT（U/mL）=x×（V样本+V试剂R1）÷V样本÷T （4）按细胞或细菌数量计算： 单位定义：每小时每104个细胞或细菌催化产生1μmol丙酮酸的量为一个GPT活力单位。 GPT（U/104cell）=x×（V样本+V试剂R1）÷（500×V样本÷V样总）÷T V样本：样本体积； V试剂R1：试剂R1体积； V样总：提取液体积； W：样本质量，g； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL； T：反应时间，0.5h； 500：细胞或细菌总数，500万。 本试剂盒仅供科研使用! |
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