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| Cat. Number | HK21261-48S |
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| Chemical Name | HK21261-48S 谷氨酰胺合成酶(GS)测试盒(酶标板法) |
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| Qty 1 |
100T/48S |
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| References | 谷氨酰胺合成酶(GS)（EC 6.3.1.2）主要存在于植物中，是生物体内氨同化的关键酶之一，催化铵离子和谷氨酸合成谷氨酰胺，不仅可以防止过多的铵离子对生物有毒性，而且谷氨酰胺也是氨的主要储存和运输形式。 测定原理： GS在ATP和Mg2+存在下，催化铵离子和谷氨酸合成谷氨酰胺；谷氨酰胺进一步转化为γ─谷氨酰基异羟肟酸，在酸性条件下与铁形成红色的络合物；该络合物在540nm处有最大吸收峰，可用分光光度计测定。 需自备的仪器和用品: 可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器/细胞破碎仪、冰和蒸馏水。 产品组成：
实验步骤: 注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。 一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献） 1、细菌、细胞或组织样品的制备 细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清;按照细菌或细胞数量（109个)：提取液体积(mL)为500~1000: 1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液)，超声波破碎细菌或细胞(冰浴，功率200W，超声3s，间隔10s，重复30 次); 8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。 组织：按照组织质量(g)：提取液体积(mL)为1:5~10 的比例(建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液)进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。 2、血清（浆）样品：直接检测（若溶液呈现浑浊，则离心取上清后再测定）。 二、试剂准备 试剂R3：临用前取一瓶加入5mL蒸馏水充分溶解备用，用不完的试剂-20℃分装可保存4周，避免反复冻融。 三、测定步骤 1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至540nm，分光光度计用蒸馏水调零。 2、在EP管中加入下列试剂：
混匀，静置10min后，5000g，常温离心10min，取200uL上清液至微量玻璃比色皿或96孔板中，测定540nm处的吸光值A。ΔA=A 测定-A对照。每个测定管需设一个对照管。 四、GS活力单位的计算 A、用微量玻璃比色皿测定的计算公式如下 1.按血清（浆）体积计算: 单位定义：每mL血清（浆）在每mL 反应体系中每min使540下吸光值变化0.01定义为一个酶活力单位。 Gs (U/mL）=ΔAxV反总÷V样÷0.01÷T 2.按样本蛋白浓度计算: 单位的定义：每mg组织蛋白在反应体系中每min使540nm下吸光值变化0.01定义为一个酶活力单位。 Gs (U/mg prot）=ΔAxV反总÷ (Cpr×V样）÷0.01÷T 3．按样本质量计算: 单位的定义：每g组织在反应体系中每min使540nm下吸光值变化0.01定义为一个酶活力单位。 Gs (U/g质量）=ΔA×V反总÷(V样+V样总×W)÷0.01÷T 4.按细菌或细胞数量计算: 单位定义：每1万个细菌或细胞在每mL反应体系中每min使540nm下吸光值变化0.01定义为一个酶活力单位。 Gs (U/104 cel1）=ΔA×V反总÷(500xV样+V样总）÷0.01÷T V反总：反应体系总体积; V样：加入样本体积; V样总：加入提取液体积; T：反应时间，30min; Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL; W：样本质量，g; 500：细菌或细胞总数，500万。 B、用96孔板测定的计算公式如下 1、按血清（浆）体积计算: 单位定义：每 mL血清(浆)在每mL 反应体系中每min使540下吸光值变化0.005定义为一个酶活力单位。 Gs (U/mL)=ΔAxV反总+V样÷0.005÷T 2、按样本蛋白浓度计算: 单位的定义：每mg组织蛋白在反应体系中每min使540nm下吸光值变化0.005定义为一个酶活力单位。 Gs (U/mg prot）=ΔAxV反总÷(Cpr×V样）÷0.005÷T 3、 按样本质量计算： 单位的定义：每g组织在反应体系中每min使540nm下吸光值变化0.005定义为一个酶活力单位。 GS（U/g 质量）=ΔA×V反总÷(V样÷V样总×W)÷0.005÷T 4、 按细菌或细胞数量计算： 单位定义：每1万个细菌或细胞在每mL反应体系中每min使540nm下吸光值变化0.005定义为一个酶活力单位。 GS（U/104 cell）＝ΔA×V反总÷（500×V样÷V样总）÷0.005÷T V反总：反应体系总体积； V样：加入样本体积； V样总：加入提取液体积； T：反应时间，30min； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL； W：样本质量，g； 500：细菌或细胞总数，500万。 本试剂盒仅供科研使用! |
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