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| Cat. Number | HK21259-96S |
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| Chemical Name | HK21259-96S 谷氨酸脱氢酶(GDH)测试盒(酶标板法) |
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| Qty 1 |
100T/96S |
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| References | 谷氨酸脱氢酶(GDH)（EC 1.4.1.2）广泛分布于植物中，和谷氨酸合成酶（GOGAT）共同参与谷氨酸的合成，在氨同化和转化成有机氮化合物的代谢中起重要作用。 测定原理： GDH催化NH4+、α-酮戊二酸和NADH，生成谷氨酸和NAD+，引起340nm吸光度下降。通过测定340nm吸光度的下降速率，计算GDH活性。 需自备的仪器和用品： 紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔UV板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。 产品组成：
实验步骤： 注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。 一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献） 1、收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每500 万细菌或细胞加入1mL提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率20%，超声3 秒，间隔10 秒，重复30 次）；8000g 4℃离心10 分钟，取上清，置冰上待测。 2、称取约0.1g 组织，加入1mL 提取液进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10 分钟，取上清，置冰上待测。 二、试剂准备 工作液的配制：在试剂R2中加入19mL试剂R1充分溶解，置于37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴5min。 三、测定步骤 1. 紫外分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。 2. 样本测定：在微量石英比色皿或96孔UV板中依次加入：
四、GDH 活性计算 a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下 1．按样本蛋白浓度计算 单位的定义：每mg组织蛋白每分钟消耗1nmol NADH定义为一个酶活力单位。 GDH（U/mg prot）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(Cpr×V样) ÷T 2．按样本质量计算 单位的定义：每g组织每分钟消耗1nmol NADH定义为一个酶活力单位。 GDH（U/g 质量）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(V样÷V样总×W)÷T 3．按细菌或细胞数量计算 单位的定义：每1万个细菌或细胞在反应体系中每分钟消耗1nmol NADH定义为一个酶活力单位。 GDH（U/104 cell）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(V样÷V样总×500)÷T V反总：反应体系总体积，2×10-4L； ε：NADH摩尔消光系数，6.22×103L/mol/cm； d：比色皿光径，1cm； V样：加入样本体积； V样总：加入提取液体积； T：反应时间，5min； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL； W：样本质量，g； 500：细菌或细胞总数，500万； 109：单位换算系数，1mol=109nmol。 b.用96孔UV板测定的计算公式如下 4．按样本蛋白浓度计算 单位的定义：每mg组织蛋白每分钟消耗1nmol NADH定义为一个酶活力单位。 GDH（U/mg prot）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(Cpr×V样) ÷T 5．按样本质量计算 单位的定义：每g组织每分钟消耗1nmol NADH定义为一个酶活力单位。 GDH（U/g 质量）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(V样÷V样总×W)÷T 6．按细菌或细胞数量计算 单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟消耗1nmol NADH定义为一个酶活力单位。 GDH（U/104 cell）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(V样÷V样总×500)÷T V反总：反应体系总体积，2×10-4L； ε：NADH摩尔消光系数，6.22×103L/mol/cm； d：96孔板光径，0.6cm； V样：加入样本体积； V样总：加入提取液体积； T：反应时间，5min； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL； W：样本质量，g； 500：细菌或细胞总数，500万； 109：单位换算系数，1mol=109nmol。 注意事项： 1、当ΔA大于0.5时，将样本进行稀释后测量。 2、由于提取液中含有一定浓度的蛋白（约1mg/mL），所以在测定样本蛋白浓度时需要减去提取液本身的蛋白含量。 本试剂盒仅供科研使用! |
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