HK21252-24S 肝脂酶(HL)测试盒(可见分光光度法)_上海惠诚生物生物试剂,标准品,仪器设备,耗材,一站式服务

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Cat. Number

HK21252-24S

Chemical Name

HK21252-24S 肝脂酶(HL)测试盒(可见分光光度法)

Qty 1

50T/24S

References

肝脂酶（hepaticlipase，HL）是一种脂肪分解酶，在肝实质细胞中合成，存在于肝脏窦周间隙内皮细胞表面和窦周间隙腔面的肝细胞微绒毛表面，可水解各种脂蛋白中的甘油三酯（TG）和磷脂（PL），使各种脂蛋白颗粒的大小和密度发生变化，当血浆中的HL 及其活性增高时，可导致血浆中低密度脂蛋白（LDL）水平升高，加速动脉粥样硬化的发生与发展。

测定原理：

肝脂酶水解α-乙酸萘酯产生α-萘酚，可与固蓝B 盐形成紫红色偶氮化合物，在595nm 有特征吸收峰，其颜色深浅在一定范围内与肝脂酶活性成正相关。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、天平、低温离心机、水浴锅、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、漩涡震荡仪、EP 管、丙酮、蒸馏水。

产品组成：

试剂名称	规格	保存条件
试剂R1	液体×1 瓶	2-8℃
试剂R2	液体×1 瓶	2-8℃
试剂R3	粉剂×1 瓶	2-8℃
试剂R4	粉剂×2 支	-20℃
标准品	粉剂×1 瓶	2-8℃

实验步骤：

注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1、组织：按照质量（g）︰试剂R1体积(mL)为1︰5~10 的比例（建议称取约0.1 g，加入1 mL 试剂R1），加入试剂R1，冰浴匀浆后于4℃，10000 ×g 离心10 min，取上清待测。

2、细胞：按照细胞数量（104 个）︰试剂R1体积（mL）为500~1000︰1 的比例（建议500 万细胞加入1 mL试剂R1）加入试剂R1，冰浴超声波破碎细胞（功率300W，超声3 秒，间隔7 秒，总时间3 min）；然后于4℃，10000×g离心10 min，取上清待测。

3、血清/血浆：直接测定。

二、试剂准备

1、试剂R3：临用前加入30 mL 双蒸水，充分溶解待用，用不完的 4℃保存两周；

2、试剂R4：临用前取1 瓶加入2 mL 双蒸水，充分溶解，用不完的试剂可-20℃分装保存一周，避免反复冻融；

3、标准品：临用前加入6.94 mL 丙酮，配成10 μmol/mL α-萘酚标准溶液，充分溶解待用，用不完的-20℃保存两周。

三、测定步骤

1、分光光度计预热30 min 以上，调节波长至595 nm，用蒸馏水调零。

2、将试剂R3在30℃预热20 min 以上。

3、将10 μmol/mL 的标准溶液用试剂R1稀释为1.25、0.625、0.3125、0.15625、0.078 μmol/mL 的标准溶液备用。

4、操作表：

在1.5 mL 离心管中依次加入下列试剂：

试剂名称（uL）	对照管	测定管	标准管	空白管
样品	100	100	-	-
标准溶液	-	-	100	-
试剂R1	450	400	400	500
试剂R2	-	50	50	50
混匀，30℃反应10 min
试剂R3	400	400	400	400
试剂R4	50	50	50	50
充分混匀，测定595 nm 处吸光值，分别记为A 对照管、A 测定管、A 标准管和A 空白管。计算ΔA=A 测定管-A 对照管，ΔA 标准=A 标准管-A 空白管。（每个测定管需设一个对照管，空白管和标准管只需做1-2 次）