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Cat. Number

HK21244-24S

Chemical Name

HK21244-24S 非蛋白质巯基测试盒(可见分光光度法)

Qty 1

50T/24S

References

生物体内巯基主要包括非蛋白质巯基和蛋白质巯基。巯基化合物在体内具有重要的解毒功能，对生物体的自我调节具有非常重要的生理意义。

检测原理：
巯基基团与5,5'- 二硫代-双-硝基苯甲酸(DTNB)反应，生成黄色化合物，在412nm处有最大吸收峰。

需自备的试剂和器材：

可见分光光度计

台式离心机

恒温水浴锅

玻璃比色皿

甲醇

研钵/匀浆器

超声破碎仪

冰和蒸馏水。

产品组成：

实验步骤：

注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1．动物、植物组织：称取约0.1g，加入1mL 的提取液，制备成10%的匀浆，10000g，常温离心10min，取上清置冰上待测。

2．细胞或细菌：按照细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为500~1000：1 的比例（建议500 万细胞加入1mL 提取液），超声波破碎细胞（功率200w，超声3 秒，间隔7 秒，总时间3min），然后10000g，常温离心10min，取上清置冰上待测。

3．血清（浆）、培养液等液体样本：向0.1mL 血清（浆）、培养液等液体样本中加入1mL 提取液，10000g，常温离心10min，取上清置冰上待测。

二、试剂准备

1、提取液的配制：将提取液1和提取液2按体积比1:1 的比例混合配制，按照样本数量配制并在当天用完；

2、试剂R2：临用前加入5 mL 无水甲醇充分溶解备用；

3、标准品：10 mg 半胱氨酸，临用前加入1.65 mL 提取液配制成50 μmol/mL 的半胱氨酸标准溶液备用，4℃可保存1 个月。

三、测定步骤

1、分光光度计预热30min以上，调节波长至412nm，分光光度计蒸馏水调零。

2、标准液的制备：将50μmol/mL标准溶液用提取液稀释至5、0.4、0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625、0.003125μmol/mL的标准液，现用现配。

3、标准液稀释可参考下表：

备注：实验中每个标准管需300μL 标准溶液。

4、操作表

试剂名称(uL)	对照管	测定管	标准管	空白管
上清液	300	300	-	-
标准溶液	-	-	300	-
试剂R1	650	650	650	650
试剂R2	-	100	100	-
H2O	100	-	-	400
涡旋混匀，室温准确反应10min，测定412nm 吸光值，分别记为A 对照、A 测定、A 标准、A 空白，计算ΔA 测定=A 测定-A 对照，算ΔA 标准=A 标准-A 空白。每个测定管需设一个对照管，标准曲线和空白管只需测1-2 次。