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| Cat. Number | HK21238-48S |
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| Chemical Name | HK21238-48S 多酚氧化酶(PPO)活性检测试剂盒(酶标板法) |
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| Qty 1 |
100T/48S |
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| References | 多酚氧化酶PPO（EC1.10.3.1）主要存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是一种含铜的氧化酶，能使一元酚和二元酚氧化产生醌，从而引起褐化，与果蔬加工、茶叶品质和组培等密切相关。 测定原理： PPO能够催化邻苯二酚产生醌，后者在410nm有特征光吸收。 需要的仪器，耗材: 1、可见分光光度计/酶标仪 2、台式离心机 3、水浴锅 4、可调式移液器 5、微量玻璃比色皿/96 孔板 6、研钵/匀浆器 7、冰和蒸馏水。 产品组成：
实验步骤： 注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。 一、样本处理（具体比例可以参考文献） 1、收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每500 万细菌或细胞加入1mL 提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率200W，超声3 秒，间隔10 秒，重复30 次）；8000g 4℃离心10 分钟，取上清，置冰上待测。 2、称取约0.1g 组织，加入1mL 提取液进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10 分钟，取上清，置冰上待测。 3、血清（浆）：直接检测。 二、试剂准备 1、提取液：临用前将粉剂R1倒入提取液中，溶液为悬浊液，使用前需摇匀。 二、测定步骤 1、分光光度计或酶标仪预热30min 以上，调节波长至410nm，蒸馏水调零。 2、样本测定 在EP 管中依次加入下列试剂：
37℃(哺乳动物)或25℃（其它物种）中准确水浴10min 后，迅速放入沸水中加热10min。充分混匀，5000g，常温离心10min，收集上清，取200μL 至微量玻璃比色皿或96 孔板中，410nm 处检测测定管和对照管吸光度，计算ΔA=A 测定-A 对照。 注意：每个测定管需要设置一个对照管，可以在不同对照管中加入不同样本的粗酶液，然后集中进行5min沸水浴处理。 四、PPO 活性计算 a.用微量玻璃比色皿测定的计算公式如下 （1）按样本蛋白浓度计算： 单位的定义：每分钟每mg 组织蛋白在每mL 反应体系中使410nm 处吸光值变化0.01 定义为一个酶活力单位。 PPO（U/mg prot）= ΔA÷0.01×V 反总÷（Cpr×V 样）÷T （2）按样本质量计算： 单位的定义：每分钟每g 组织在每mL 反应体系中使410nm 处吸光值变化0.01 定义为一个酶活力单位。 PPO（U/g 质量）=ΔA÷0.01×V 反总÷（W÷V 样总×V 样）÷T （3）按细菌或细胞数量计算： 单位的定义：每分钟每1 万个细菌或细胞在每mL 反应体系中使410nm 处吸光值变化0.01 定义为一个酶活力单位。 PPO（U/104 cell）=ΔA÷0.01×V 反总÷（500÷V 样总×V 样）÷T b.用96 孔板测定的计算公式如下 （1）按样本蛋白浓度计算： 单位的定义：每分钟每mg 组织蛋白在每mL 反应体系中使410nm 处吸光值变化0.005 定义为一个酶活力单位。 PPO（U/mg prot）=ΔA÷0.005×V 反总÷（Cpr×V 样）÷T （2）按样本质量计算： 单位的定义：每分钟每g 组织在每mL 反应体系中使410nm 处吸光值变化0.005 定义为一个酶活力单位。 PPO（U/g 质量）=ΔA÷0.005×V 反总÷（W×V 样÷V 样总）÷T （3）按细菌或细胞数量计算： 单位的定义：每分钟每1 万个细菌或细胞在每mL 反应体系中使410nm 处吸光值变化0.005 定义为一个酶活力单位。 PPO（U/104 cell）=ΔA÷0.005×V 反总÷（500÷V 样总×V 样）÷T V 反总：反应体系总体积； V 样：加入反应体系中样本体积； V 样总：加入提取液体积； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL； W：样本质量，g； 500：细菌或细胞数量，500 万； T：反应时间，10min。 注意事项： 不同样本的多酚氧化酶最佳的反应温度略有差别，可在25-37℃之间进行调节。 本试剂盒仅供科研使用! |
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