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| Cat. Number | HK21229-96S |
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| Chemical Name | HK21229-96S 单宁含量测试盒(酶标板法) |
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| Qty 1 |
100T/96S |
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| References | 单宁又称植物多酚，是一类广泛存在于植物体内的多元酚化合物。单宁可作为潜在的生物标记物；与蛋白质结合的能力又称为收敛性或涩性。其收敛性是多种生理活性的基础，如止血、抗肿瘤、抗衰老等生理活性，也是影响产品口感的因素之一。 测定原理： 根据光谱特性，单宁在275nm下有较强的紫外吸收，通过利用活性炭能够特异吸附单宁的性质来检测单宁含量。 需自备的仪器和用品： 紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔UV板、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、30-50目筛、蒸馏水。 产品组成：
实验步骤： 注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。 一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献） 将样本烘干至恒重，粉碎，过30-50 目筛之后，称取约0.05g，加入1mL 提取液（封口膜封口防止液体溅出），于70℃水浴，准确提取30min，期间可摇晃数次。12000rpm，25℃，离心10min，取上清，用提取液定容至1mL，待测。 二、试剂准备 1、标准品：10 mg 单宁酸。临用前加入1.175 mL 提取液溶解为5000 nmol/mL 的标准液，2-8℃保存两周。 三、测定步骤 1. 紫外分光光度计/酶标仪预热30min，波长调至275nm，紫外分光光度计提取液调零。 2. 标准液的稀释：将标准液用提取液稀释为25、12.5、6.25、3.125、1.5625、0.78125nmol/mL标准溶液。 3. 加样表：
充分混匀震荡5min，13000g 室温离心20min。取200μL 上清液测定275nm 下的吸光度，分别记为A 测定管、A 对照管、A 标准管、A 空白管，计算ΔA 测定=A 对照管-A 测定管，A 标准=A 标准管-A 空白管。每个测定管需设一个对照管。标准曲线和空白管只需测1-2 次。 四、单宁含量计算 1．标准曲线的绘制： 根据标准管的浓度（y，nmol/mL）和吸光度ΔA标准（x，ΔA标准），建立标准曲线。根据标准曲线，将ΔA测定（x，ΔA测定）带入公式计算样本浓度（y，nmol/mL）。 2．单宁含量计算： （1）按蛋白浓度计算 单宁含量（nmol/mg prot）=y×V提取÷(V提取×Cpr) （2）按样本质量计算 单宁含量（nmol/g 质量）=y×V提取÷W Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL； W：样本质量，g； V提取：提取液体积。 注意事项： 1. 如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。注意同步修改计算公式。 2. 按蛋白浓度计算时，由于提取液中含有破坏蛋白结构的成分，故需要重新提取蛋白进行测定。 本试剂盒仅供科研使用! |
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