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Cat. Number

HK21201-96S

Chemical Name

HK21201-96S 胞浆异柠檬酸脱氢酶(ICDHc)测试盒(酶标板法)

Qty 1

100T/96S

References

胞浆异柠檬酸脱氢酶ICDHc（EC 1.1.1.42）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化异柠檬酸脱氢脱羧生成 α-酮戊二酸，同时还原NADP+生成NADPH。ICDHc是细胞质中除了磷酸戊糖途径外又一种NADPH重要来源，在逆境中该酶活性通常会发生显著变化。

测定原理：

利用ICDHc催化NADP+还原成NADPH反应，在340 nm下测定NADPH浓度的增加。

需自备的仪器和用品：

紫外分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板（UV 板）、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

产品组成：

试剂名称	规格	保存条件
提取液	液体×1 瓶	2-8℃
试剂R1	粉剂×1 瓶	2-8℃
试剂R2	粉剂×1 支	2-8℃
试剂R3	粉剂×1 支	2-8℃

实验步骤：

注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1、细菌、细胞或组织样本的制备：

细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每200 万细菌或细胞加入400μL 提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率20%，超声3s，间隔10s，重复30 次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

组织：称取约0.1g 组织，加入1mL 提取液进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2、血清（浆）样本：直接检测。

二、试剂准备

1．试剂R1：用时加入20 mL 提取液溶解；

2．试剂R2：用时每支加275 μL 双蒸水充分溶解备用；

3．试剂R3：用时每支加275 μL 双蒸水充分溶解备用；

4．工作液配制：将试剂R1、试剂R2、试剂R3按85：1：1 的比例混合，现用现配。

三、测定步骤

1、分光光度计/酶标仪预热30min 以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。

2、按下表步骤加样：

试剂名称(uL)	测定管
工作液	190
样本	10

将上述试剂按顺序加入微量石英比色皿/石英96 孔板中，加样本的同时开始计时，在340nm 波长下记录20 秒时的初始吸光度A1；迅速将比色皿连同反应液一起放入37℃水浴中，准确反应2 分钟（酶标仪有控温功能，可以将温度调至37℃）；迅速取出比色皿并擦干，记录2 分20 秒时的吸光度A2。计算ΔA=A2-A1。

四、ICDHc 活力单位的计算

a、按微量石英比色皿计算：

1、血清（浆）ICDHc 活力的计算

单位的定义：每mL 血清（浆）在反应体系中每分钟生成1nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。

ICDHc（U/mL）=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×10⁹]÷V 样本÷T

2、组织中ICDHc 活力的计算

（1）按样本蛋白浓度计算：

单位的定义：每mg 组织蛋白在反应体系中每分钟生成1nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。

ICDHc（U/mg prot）=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×10⁹]÷(V 样本×Cpr)÷T

（2）按样本质量计算：

单位的定义：每g 组织在反应体系中每分钟生成1nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。

ICDHc（U/g 质量）=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×10⁹]÷(W÷V 提取×V 样本) ÷T