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肝素亲和介质适用于与肝素分子有特异性吸附作用的蛋白分子的分离和纯化,例如:凝血因子、抗凝血酶III、生长因子、干扰素以及脂肪酶等。肝素亲和介质以琼脂糖软胶微球作为基质,采用惠诚生物特有的化学键和技术固定肝素分子,通过肝素与抗凝血酶III或具有类似结构蛋白分子之间的特异性结合力实现目标蛋白的分离,上海惠诚生物提供肝素亲和介质,详情致电惠诚生物021-60498804.
肝素亲和介质具有以下特点:
1.亲和力好
2.蛋白活性回收率高
3.化学稳定性好
上海惠诚生物肝素亲和介质产品说明书如下:
一、 产品简介
肝素(Heparin)是一种含硫酸酯的酸性多糖,能和抗凝血因子III、凝血酶、类凝血酶、人凝血因子IX、XI和VIII,也能和大肠杆菌表达的人白介素、人前列腺生长因子、重组人血管内皮生长因子 、软骨生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、重组人酸性成纤维细胞生长因子、重组肝细胞生长因子、重组鼠肝素辅因子II、重组人血小板第四因子、重组人内皮抑素、重组人角质细胞生长因子等生物大分子结合,所以肝素亲和介质可以用于这类物质的纯化。 肝素亲和层析介质以交联琼脂糖为基质,采用环氧活化工艺,将肝素偶联到琼脂糖凝胶上,该填料具有很高的物理化学稳定性,配基不易脱落,使用寿命长,使用方便,应用广泛。
二 、产品特性
参数 | 指标 |
基质 | 琼脂糖凝胶微球 |
配基 | Heparin |
形状 | 球形 |
介质平均粒径 | 90 μm (50~160) |
配基密度 | 3.5mg heparin/ml wet gel |
动态载量 | 2mg AT III/ml wet gel |
最高流速(25℃) | 500 cm/h |
最高耐压 | 0.3 MPa (3 bar) |
pH稳定性 | 4~12(长时间);4~13(短时间) |
保存 | 4~8 oC(0.05M乙酸钠+20%乙醇) |
三、操作步骤
肝素亲和层析介质广泛用于抗凝血因子III、凝血酶、类凝血酶、人凝血因子IX、XI和VIII等生物大分子的分离纯化。层析操作通常包括装柱、平衡、进料、淋洗、洗脱、再生等步骤。
1.平衡:用5~10CV的平衡缓冲液(20-50mM PB或Tris/HCl,pH 7.4-8.0,可加入0.15M NaCl抑制非特异吸附)平衡层析柱,至流出液电导和pH不变(与平衡液一致)。
2.进料:样品缓冲液应尽可能与平衡液一致。固体样品可用平衡液溶解配制;低浓度样品溶液可用平衡液透析;高浓度样品溶液可用平衡液稀释。为了避免堵塞层析柱,样品应经离心或微滤处理。进料量根据介质的载量和料液中目标蛋白的含量计算。
3.淋洗:上样完毕后继续用平衡缓冲液淋洗至基线。
4.洗脱:用洗脱缓冲液(20-50mM PB或Tris/HCl+1-2M NaCl,pH7.4-8.0,NaCl浓度需要根据目标蛋白的结合力进行适当调整)洗脱,收集流出液。可采用线性梯度或阶越式梯度洗脱。
5.原位清洗:为了避免不同样品间的相互干扰,或者当介质污染比较严重时(反压增加),需要对介质进行在位清洗。
(1)对于以离子键结合的蛋白,可用2~3 CV以上的2M NaCl清洗,并用3 CV以上的纯水冲洗。 (2)对沉淀或变性蛋白蛋白,可用0.1M NaOH清洗(1~2h),并用3~10 CV平衡液和3 CV以上的纯水冲洗。也可用6M Gua-HCl或8M Urea清洗(0.5~1h) (3)对疏水性结合的蛋白,可用0.1~0.5%的非离子去污剂清洗(1~2h),并用3~10 CV的纯水冲洗。
其它注意事项:在装柱、使用和保存柱子的时候,要避免柱子流干,气泡进入。
四、具体应用实例
转基因羊奶中抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)的分离纯化
层析柱:2.5 cm × 1.0 cm I.D.,CV=2 mL
样品:预处理的转基因羊奶(0.45 µm滤膜过滤,上样10 mL)
平衡缓冲液(A):50 mM Tris/Hcl, pH 7.2
洗脱缓冲液(B):50 mM Tris/Hcl+1 M NaCl, pH 7.2
流速:1 mL/min
五、特色服务
(1)提供介质筛选及工艺开发的咨询。
(2)接受客户委托开发各种分离介质和分离工艺。
(3)按客户要求提供各种规格的预装柱。
(4)为客户提供专业的售前和售后服务。
六、层析介质及预装柱产品订购指南
亲和层析介质及预装柱
产品名称 | 货号 | 规格 | 备注 |
His标签蛋白纯化介质(IDA) | 11-0010-01 | 5ml | 琼脂糖基质,高载量
(默认Ni2+,若需螯合其他离子,请告知销售人员) |
11-0010-02 | 50ml | ||
11-0010-03 | 250ml | ||
11-0010-04 | 500ml | ||
11-0010-05 | 1000ml | ||
His标签蛋白纯化柱(IDA) | 11-0020-01 | 1ml | |
11-0020-02 | 5ml | ||
His标签蛋白纯化介质(NTA) | 11-0011-01 | 5ml | 琼脂糖基质,低脱落,可耐受DTT,β-Me等还原剂
(默认Ni2+,若需螯合其他离子,请告知销售人员) |
11-0011-02 | 50ml | ||
11-0011-03 | 250ml | ||
11-0011-04 | 500ml | ||
11-0011-05 | 1000ml | ||
His标签蛋白纯化柱(NTA) | 11-0021-01 | 1ml | |
11-0021-02 | 5ml | ||
His标签蛋白纯化介质(IMAC) | 11-0012-01 | 5ml | 琼脂糖基质,未螯合金属离子
(由客户DIY金属离子) |
11-0012-02 | 50ml | ||
11-0012-03 | 250ml | ||
11-0012-04 | 500ml | ||
11-0012-05 | 1000ml | ||
His标签蛋白纯化柱(IMAC) | 11-0022-01 | 1ml | |
11-0022-02 | 5ml | ||
His标签蛋白纯化介质(HF-IDA) | 11-1010-01 | 5ml | 聚丙烯酸酯基质,耐压,高流速
(默认Ni2+,若需螯合其他离子,请告知销售人员) |
11-1010-02 | 50ml | ||
11-1010-03 | 250ml | ||
11-1010-04 | 500ml | ||
11-1010-05 | 1000ml | ||
His标签蛋白纯化柱(HF-IDA) | 11-1020-01 | 1ml | |
11-1020-02 | 5ml | ||
His标签蛋白纯化介质(HF-NTA) | 11-1011-01 | 5ml | 聚丙烯酸酯基质,耐压,高流速
(默认Ni2+,若需螯合其他离子,请告知销售人员) |
11-1011-02 | 50ml | ||
11-1011-03 | 250ml | ||
11-1011-04 | 500ml | ||
11-1011-05 | 1000ml | ||
His标签蛋白纯化柱(HF-NTA) | 11-1021-01 | 1ml | |
11-1021-02 | 5ml | ||
GST标签蛋白纯化介质 | 12-0010-01 | 5ml | 琼脂糖基质,特异性强 |
12-0010-02 | 50ml | ||
12-0010-03 | 250ml | ||
12-0010-04 | 500ml | ||
12-0010-05 | 1000ml | ||
GST标签蛋白纯化柱 | 12-0020-01 | 1ml | |
12-0020-02 | 5ml | ||
肝素亲和介质 | 15-0010-01 | 5ml | 琼脂糖基质,适应范围广 |
15-0010-02 | 50ml | ||
15-0010-03 | 250ml | ||
15-0010-04 | 500ml | ||
15-0010-05 | 1000ml | ||
肝素预装柱 | 15-0020-01 | 1ml | |
15-0020-02 | 5ml | ||
抗体纯化介质(Pro G) | 16-0010-01 | 5ml | 琼脂糖基质,可吸附ProA介质无法吸附的某些IgG |
16-0010-02 | 50ml | ||
16-0010-03 | 250ml | ||
16-0010-04 | 500ml | ||
16-0010-05 | 1000ml | ||
抗体纯化柱(Pro G) | 16-0020-01 | 1ml | |
16-0020-02 | 5ml | ||
抗体纯化介质(Pro A) | 18-0010-01 | 5ml | 琼脂糖基质,耐碱洗 |
18-0010-02 | 50ml | ||
18-0010-03 | 250ml | ||
18-0010-04 | 500ml | ||
18-0010-05 | 1000ml | ||
抗体纯化柱(ProA) | 18-0020-01 | 1ml | |
18-0020-02 | 5ml |
活化偶联介质
产品名称 | 货号 | 规格 | 备注 |
环氧活化偶联介质 | 21-0010-01 | 50ml | 偶联化学键牢固,不易脱落 推荐pH值10-14 |
21-0010-02 | 250ml | ||
21-0010-03 | 500ml | ||
21-0010-04 | 1000ml | ||
NHS活化偶联介质 | 22-0010-01 | 50ml | 反应活性强,适宜弱酸性或中性条件偶联 推荐pH值6-8 |
22-0010-02 | 250ml | ||
22-0010-03 | 500ml | ||
22-0010-04 | 1000ml |
离子交换介质及预装柱
产品名称 | 货号 | 规格 | 备注 |
DEAE弱阴离子交换介质 | 31-0010-01 | 50ml | 琼脂糖基质 |
31-0010-02 | 500ml | ||
31-0010-03 | 1000ml | ||
DEAE弱阴离子交换柱 | 31-0020-01 | 5ml | |
Q强阴离子交换介质 | 32-0010-01 | 50ml | 琼脂糖基质 |
32-0010-02 | 500ml | ||
32-0010-03 | 1000ml | ||
Q强阴离子交换柱 | 32-0020-01 | 5ml | |
CM弱阳离子交换介质 | 33-0010-01 | 50ml | 琼脂糖基质 |
33-0010-02 | 500ml | ||
33-0010-03 | 1000ml | ||
CM弱阳离子交换柱 | 33-0020-01 | 5ml | |
S强阳离子交换介质 | 34-0010-01 | 50ml | 琼脂糖基质 |
34-0010-02 | 500ml | ||
34-0010-03 | 1000ml | ||
S强阳离子交换柱 | 34-0020-01 | 5ml | |
HP-DEAE60弱阴离子交换介质 | 31-1010-01 | 50ml | 聚丙烯酸酯基质,高流速 |
HP-DEAE30弱阴离子交换介质 | 31-1011-01 | 50ml | 聚丙烯酸酯基质,高分辨率 |
HP-Q60强阴离子交换介质 | 32-1010-01 | 50ml | 聚丙烯酸酯基质,高流速 |
HP-Q30强阴离子交换介质 | 32-1011-01 | 50ml | 聚丙烯酸酯基质,高分辨率 |
HP-CM60弱阳离子交换介质 | 33-1010-01 | 50ml | 聚丙烯酸酯基质,高流速 |
HP-CM30弱阳离子交换介质 | 33-1011-01 | 50ml | 聚丙烯酸酯基质,高分辨率 |
HP-S60强阳离子交换介质 | 34-1010-01 | 50ml | 聚丙烯酸酯基质,高流速 |
HP-S30强阳离子交换介质 | 34-1011-01 | 50ml | 聚丙烯酸酯基质,高分辨率 |
疏水层析介质及预装柱
产品名称 | 货号 | 规格 | 备注 |
苯基疏水介质(低密度) | 41-0010-01 | 50ml | 琼脂糖基质,适于中度疏水蛋白 |
41-0010-02 | 500ml | ||
41-0010-03 | 1000ml | ||
苯基疏水柱(低密度) | 41-0020-01 | 5ml | |
苯基疏水介质(高密度) | 41-0011-01 | 50ml | 琼脂糖基质,适于低度疏水蛋白 |
41-0011-02 | 500ml | ||
41-0011-03 | 1000ml | ||
苯基疏水柱(高密度) | 41-0021-01 | 5ml | |
辛基疏水介质 | 42-0010-01 | 50ml | 琼脂糖基质,适于中度疏水蛋白 |
42-0010-02 | 500ml | ||
42-0010-03 | 1000ml | ||
辛基疏水柱 | 42-0020-01 | 5ml | |
丁基疏水介质 | 43-0010-01 | 50ml | 琼脂糖基质,适于高度疏水蛋白 |
43-0010-02 | 500ml | ||
43-0010-03 | 1000ml | ||
丁基疏水柱 | 43-0020-01 | 5ml |
凝胶过滤介质及预装柱
产品名称 | 货号 | 规格 | 备注 |
G25凝胶过滤介质 | 51-0010-01 | 100ml | 分离范围:1KD-10KD |
51-0010-02 | 500ml | ||
51-0010-03 | 1000ml | ||
G25脱盐柱 | 51-0020-01 | 5ml | |
G50凝胶过滤介质 | 52-0010-01 | 100ml | 分离范围:4KD-30KD |
52-0010-02 | 500ml | ||
52-0010-03 | 1000ml | ||
G50凝胶柱 | 52-0020-01 | 5ml |